REZUMAT TEZĂ DOCTORAT

Size: px
Start display at page:

Download "REZUMAT TEZĂ DOCTORAT"

Transcription

1 UNIVERSITATEA DE MEDICINĂ ŞI FARMACIE CRAIOVA FACULTATEA DE MEDICINĂ GENERALĂ REZUMAT TEZĂ DOCTORAT Rolul celulelor stem progenitoare circulante şi al receptorilor factorilor de creştere în diagnosticul şi terapia tumorilor cerebrale CONDUCĂTOR ŞTIINŢIFIC Prof. Univ. Dr. Dricu Anica DOCTORAND Bănicioiu Mihai Daniel Studiile au fost finanţate din proiectele: FONDUL SOCIAL EUROPEAN, COD: POSDRU/6/1.5/S/8 PARTENERIATE IN DOMENII PRIORITARE, COD PROIECT: PNI/ 4.1/41-063/2007 CRAIOVA 2011

2 Investeşte în oameni! FONDUL SOCIAL EUROPEAN Programul Operaţional Sectorial Dezvoltarea Resurselor Umane Axa Prioritară: 1. Educaţia şi formarea profesională în sprijinul creşterii economice şi dezvoltării societăţii Domeniul Major de Intervenţie: 1.5. Programe doctorale şi postdoctorale în sprijinul cercetării Titlu proiect: "Sprijinirea tinerilor doctoranzi cu frecvenţă prin acordarea de burse doctorale" Cod Proiect: POSDRU/6/1.5/S/8 Beneficiar: Universitatea de Medicină şi Farmacie din Craiova 2

3 CUPRINS PARTEA GENERALĂ (STADIUL CUNOAŞTERII) 1. TUMORILE CEREBRALE 1.1 Consideraţii generale Clasificarea tumorilor cerebrale Epidemiologie Simptomatologie Diagnostic şi investigaţii Tratamente Celulele stem canceroase cerebrale GLIOBLASTOMUL 2.1 Incidenţă Etiologie şi factori predictivi Tablou clinic Biologie moleculară Rolul celulelor stem progenitoare circulante în diagnosticul glioblastoamelor TIPURI DE TRATAMENT ÎN GLIOBLASTOM 3.1 Terapia chirurgicală Radioterapia Chimioterapia RECEPTORII TIROZIN-KINAZICI ŞI LIGANZII LOR 4.1 Familia IGF Familia EGF Familia PDGF Familia VEGF...12 PARTEA SPECIALĂ (STUDIU EXPERIMENTAL) 5. OBIECTIVE MATERIAL ŞI METODĂ Materiale Celule şi culturi celulare Tratarea celulelor Determinarea viabilităţii celulare Determinarea timpului de dublare a celulelor (T2) Western Blotting Citometrie de flux Analiza statistică REZULTATE DISCUŢII CONCLUZII...31 BIBLIOGRAFIE SELECTIVĂ

4 INTRODUCERE În ciuda descoperirilor recente din lumea medicală, una dintre principalele cauze de mortalitate şi morbiditate în intreaga lume o reprezintă cancerul. În ţara noastră, incidenţa tumorilor cerebrale maligne este de 4,3/ locuitori, ele constituind 2% din totalitatea neoplaziilor la adult, mortalitatea generală fiind de 4,65/ locuitori. (Iacob et al. 2004). În această teză de doctorat, cercetarea a fost restrânsă la studierea unor aspecte neelucidate încă, referitoare la clasa tumorilor cerebrale. Tumorile cerebrale prezintă o mare varietate ca tip, localizare, rată de creştere şi sunt extrem de heterogene din punct de vedere fenotipic şi genotipic. Cea mai frecventă şi cea mai agresivă tumoră cerebrală la adulţi este reprezentată de glioblastomul multiform, caracterizat de o creştere rapidă şi de capacitatea de a infiltra ţesuturile adiacente, având o rată medie de supravieţuire de aproximativ 14 luni. Lucrarea de faţă este un răspuns la necesitatea observată şi prin studierea literaturii de specialitate în ceea ce priveşte diagnosticul şi terapia tumorilor cerebrale. Acest domeniu este în continuu cercetat şi are extraordinar de multe aspecte neexploatate încă. În aceste condiţii, am considerat oportun sa elucidez, măcar în parte, următoarele probleme legate de - corelaţia dintre gradul tumoral şi numărul de celule endoteliale progenitorii circulante, - efectul produs de inhibitorul STI571 (Imatinib mesylate) asupra celulelelor de glioblastom în vitro şi - evaluarea efectului citotoxic al agentului de metilare S-adenozil-metionina (SAM) asupra tumorilor cerebrale de grad înalt (high grade glioma, HGG) şi a interferenţei cu expresia IGF-1R în vitro. La finalizarea acestei teze, doresc sa menţionez că lucrarea de faţă nu ar fi putut fi dusă la bun sfârşit fără îndrumarea competentă şi susţinută a doamnei Prof. Dr. Anica Dricu, conducătorul meu de doctorat, căreia îi adresez sincere mulţumiri. Cuvinte cheie:tumori cerebrale, celule stem progenitoare circulante, receptori ai factorilor de creştere. 4

5 PARTEA GENERALĂ (STADIUL CUNOAŞTERII) 1. TUMORILE CEREBRALE 1.1 Consideraţii generale Deşi cele mai recente tratamente împotriva cancerelor controlează creşterea şi proliferarea celulelor tumorale, acestea nu sunt capabile de a eradica în totalitate masa de celule tumorale (Schulenburg 2006). Metodele terapeutice folosite în tratamentul tumorilor cerebrale sunt foarte variate şi alegerea lor este dictată de factori precum vârsta pacientului, dimensiunea şi localizarea tumorii sau rata de creştere estimată postterapeutic. În prezent, biologia tumorilor cerebrale este incomplet cunoscută, mai ales în ceea ce priveşte relaţia cu parenchimul adiacent indemn. 1.2 Clasificarea tumorilor cerebrale În conformitate cu clasificarea WHO, Organizaţia Mondială a Sănătaţii (WHO) a clasificat tumorile cerebrale astfel: 1. Tumori neuroepiteliale: a) Tumori gliale; b) Tumori neuronale şi neuronal-gliale mixte; c) Tumori nongliale 2. Tumori meningeale: a) Meningioame; b) Hemangiopericitoame; c) Leziuni melanocitice 3. Tumori ale celulelor germinale:a) Germinoame; b) Carcinoame embrionare; c)tumori ale sinusului endodermal; d) Coriocarcinoame; e) Teratoame; f) Tumori mixte ale celulelor germinale 4. Tumori ale regiunii selare: a) Adenoame pituitare; b) Carcinoame pituitare; c)craniofaringioame 5. Tumori cu histogeneză nesigură: 6. Limfomul primar al SNC 7. Tumori ale nervilor periferici ce afectează SNC: 8. Tumorile metastatice 5

6 Glioamele maligne reprezintă o clasă de tumori cerebrale care include mai multe entităţi heterogene cu origine comună, derivând din celulele gliale. Din punct de vedere histopatologic, glioamele sunt clasificate în astrocitoame, oligodendroglioame, oligoastrocitoame şi tumori ependimale. Glioblastoamele sunt stadializate în 4 grade, gradul IV fiind reprezentat de glioblastomul multiform cu gradul cel mai înalt de malignitate, acesta fiind cea mai agresivă şi cea mai frecventă formă, fiind caracterizat prin celularitate intensă, activitate mitotică, proliferări microvasculare şi necroză (Louis et al. 2007). 1.3 Epidemiologie Etiologia tumorilor cerebrale este necunoscută până în prezent. Totuşi sunt câteva sindroame ereditare familiale care au fost asociate cu apariţia tumorilor cerebrale primare: neurofibromatoza 1 şi 2, sindromul Li-Fraumeni şi sindromul Turcot (Louis and von Deimling 1995). 1.4 Simptomatologie Creşterea masei tumorale determină semnele specifice hipertensiunii intracraniene şi simptome nespecifice ale tumorilor cerebrale precum: convulsii, hemipareze, dificultăţi de vorbire, tulburări de personalitate, crize convulsive această simptomatologie depinzând de localizarea tumorii. 1.5 Diagnostic şi investigaţii Diagnosticul de certitudine al tumorilor cerebrale este histopatologic şi se pune după analiza unui fragment de ţesut tumoral în urma unei biopsii. De asemeni, investigaţiile imagistice au o importanţa deosebită în stabilirea diagnosticului, examinarea tomografiei computerizate (CT) furnizând date importante în legătură cu diametrele, localizarea şi caracteristicile tumorii, iar rezonanţa magnetică nucleară (RMN) permite identificarea cu precizie a caracteristicilor tumorale cât şi raporturile acesteia cu structurile anatomice învecinate. Spectroscopia prin rezonanţă magnetică (RMS) este o metodă imagistica relativ nouă ce vizualizează distribuţia regională a substanţelor chimice asociate cu metabolismul tumoral şi modificările biochimice. 1.6 Tratamentul tumorilor cerebrale Terapia standard pentru patologia tumorală cerebrală este reprezentată de chirurgie, radioterapie şi chemoterapie, aceste metode având însă o specificitate redusă pentru celulele 6

7 tumorale precum şi efecte adverse semnificative. În plus, ele pot determina apariţia de novo a unei alte tumori. Chirurgia reprezintă în prezent principala modalitate de tratament a tumorilor cerebrale. Radioterapia s-a dovedit utilă în tratamentul majorităţii tumorilor cerebrale şi a metastazelor. Radioterapia poate fi utilă ca şi monoterapie, pre- sau postoperator, sau în asociere cu chimioterapia. Dezavantajele chimioterapiei sunt reprezentate de rezistenţa intrinsecă la agenţii chimioterapici şi de dezvoltarea chimiorezistenţei pe parcursul tratamentului. De aceea se recurge adesea la tratamente care utilizează combinaţii dintre diferiţi agenţi chimioterapici. 1.7 Celulele stem canceroase cerebrale Conform teoriei moderne, transformarea malignă a celulei normale în celula canceroasă se petrece la nivelul celulelor stem existente în ţesutul adult. În pofida cercetărilor intense din ultima perioadă, originea exactă a celulelor stem canceroase (CSC) rămâne necunoscută. În tumorile cerebrale, celulele stem canceroase se găsesc în procent de 1% până la 30% şi, conform datelor publicate în literatura de specialitate, prezintă proprietăţi similare celulelor stem neurale (Beier et al. 2007).În prezent, markerii de suprafaţă ai celulelor stem canceroase au fost identificaţi în numeroase tipuri de cancere. La nivel molecular, o etapă importantă în apariţia celulelor stem tumorale (CST) ar putea fi reprezentată de alterarea căilor de autoregenerare a celulelor stem adulte existente în tesutul cerebral. În tumorile cerebrale sunt afectate deopotrivă căile proliferării şi diferenţierii celulare, cât şi mecanismele morţii celulare. Proto-oncogenele sunt convertite în oncogene şi devin amplificate sau suferă mutaţii activatoare. Conceptul ca dezvoltarea şi progresia tumorala să depindă de evoluţia CST schimbă dramatic posibilităţile prin care boala canceroasă poate fi vindecată. Identificarea şi terapia ţintită împotriva CST reprezintă o provocare majoră în terapia modernă anticanceroasă, cercetătorii încercând să găsească noi terapii molecular ţintite împotriva acestor celule. 7

8 Figura 1. Terapia ţintită împotriva CST. Noul tip de terapie tumorală 2.GLIOBLASTOMUL 2.1.Incidenţa Glioamele maligne sunt cele mai frecvente tipuri de tumori cerebrale primare la adulţi în unele studii, fiind relatate ca reprezentând aproximativ 50% din tumorile cerebrale primare, glioblastomul fiind cel mai întâlnit subtip histologic la adulţi (Lonn et al 2005) Etiologie şi factori predictivi Glioblastomul primar apare cu predilecţie la adulţi, cu vârsta între 40 şi 70 ani, bărbaţii fiind mai frecvent afectaţi. Radiaţiile ionizante au fost de asemenea asociate cu o probabilitate crescută de apariţie a acestuia (Ohgaki and Kleihues 2005) Tablou clinic Simptomatologia glioblastoamelor primare se instalează relativ rapid, în mai puţin de 3 luni, în cazul glioblastoamelor secundare istoricul clinic al bolii fiind mai lung - intre 1 şi 5 ani (Ohgaki and Kleihues 2005). Cele mai frecvente localizări sunt: lobul frontal, lobul parietal, lobul temporal şi lobul occipital. Simptomatologia poate fi nespecifică, cuprinzând semnele presiunii crescute intracraniene sau specifică localizării tumorii. Simptome generale cuprind: cefalee, vărsături, tulburări vestibulare, crize comiţiale. 8

9 2.4. Biologie moleculară Procesul de transformare neoplazică constă în modificări la nivelul oncogenele, genelor supresoare tumorale, genelor ce sunt implicate în repararea AND-ului celular şi genelor ce mediază ciclul celular şi apoptoza. Glioblastoamele primare se caracterizează prin amplificarea sau supraexpresia EGFR (receptorul factorului de creştere epidermal) şi supraexpresia MDM2, LOH 10q (mutaţii ale genelor PTEN şi RB1), mutaţii ale genei TP53 fiind găsite mai rar în acest grup de tumori (Ohgaki and Kleihues 2007). În cazul astrocitoamelor de grad inferior frecvent apar mutaţii ale genei TP53, acestea fiind cele mai timpurii alterări genetice detectate. De asemenea, supraexpresia factorului de creştere plachetar (PDGF) este un eveniment timpuriu în dezvoltarea astrocitoamelor de grad inferior. În progresia către glioblastomul secundar grad IV, LOH 10q intervine ca un eveniment tardiv. Mutaţiile genetice pot apărea şi progresiv, de la tumorile de grad inferior, grad II către cele de grad III şi apoi către glioblastomul secundar, grad IV. Durata până la progresia către gradul IV poate varia între 1 şi 5 ani. Figura 2. Progresia de la glioamele cu grad mic de malignitate la glioblastomul primar si secundar. 9

10 2.5 Rolul celulelor stem progenitoare circulante în diagnosticul glioblastoamelor Glioblastoamele sunt caracterizate de o neovascularizaţie bogată, ce joacă un rol deosebit de important în dezvoltarea şi progresia tumorală. Celulele endoteliale progenitorii (CEP) sunt celule derivate din măduva hamatogenă şi au proprietatea de a se diferenţia în celule endoteliale mature. Fenotipul CEP este caracterizat de expresia markerului specific hematopoietic CD34, markerul specific celulelor stem CD133 şi a markerului endotelial VEGFR2 (Peichev et al. 2000). Eliberarea şi mobilizarea CEP este influenţată de factorii de creştere pro-angiogenici (Kalka et al. 2000). Rafat et al. a desfăşurat un studiu în care a inclus pacienţi cu glioblastom (GBM) şi pacienţi cu metastaze cerebrale, numărul de CEP circulante fiind semnificativ crescut la pacienţii cu GBM faţă de cei cu metastaze şi faţă de grupul control. Deşi mecanismele fiziopatologice prin care intervin şi influentează angiogeneza şi progresia tumorală nu sunt pe deplin cunoscute, CEP s-au dovedit a fi un potenţial marker atât pentru neoangiogeneza tumorală cât şi pentru răspunsul la terapia antiangiogenică. 3. TIPURI DE TRATAMENT ÎN GLIOBLASTOM 3.1 TERAPIA CHIRURGICALĂ Intervenţia chirurgicală are un rol important în managementul terapiei glioblastomului. Scopurile intervenţiei chirurgicale sunt obţinerea materialului bioptic necesar examenului histopatologic şi extirparea tumorii în scop curativ. Glioblastomul cât şi astrocitomul de grad III WHO sunt tumori cu caracter infiltrativ, marginile tumorii fiind neregulate şi insotite de edem peritumoral, astfel o rezecţie totală fiind greu de realizat. 3.2 RADIOTERAPIA Radioterapia convenţională Tratamentul standard după rezecţia totală sau parţială a tumorilor de grad III sau IV este radioterapia externă fracţionată. Recomandările actuale sunt administrarea unor doze totale de Gy, în fracţiuni de Gy pe zi, cinci zile pe săptămână, timp de 6 sau 7 săptămâni (Laperriere et al. 2002). 10

11 3.2.2 Radioterapia streotactică Avantajele radioterapiei stereotactice sunt reprezentate de faptul că dozele de radiaţii sunt mai mici decat cele utilizate în radioterapia fracţionată, datorită direcţionării mai precise a radiaţiilor pe direcţia masei tumorale. Metoda are eficacitate crescută, iar riscul lezării ţesutului normal adiacent este mai scazut. Două din metodele de tratament ale radioterapiei stereotactice sunt Gamma knife şi Cyberknife Alte modalităţi de radioterapie BNCT (boron neutron capture therapy) este o metodă de tratament promiţătoare în terapia glioblastomului, dar deocamdată este înca la nivel experimental (Joensuu et al 2003). BNCT se bazează pe capacitatea particulelor de 10B de a capta neutroni termici şi de a determina dezintegrarea acestora în particule α şi nuclei de litiu. Radioterapia hiperfracţionată ce utilizează mai multe doze mici de radiaţie pe parcursul unei zile şi creşterea dozei totale până la 70 Gy, nu a îmbunătăţit supravieţuirea pacienţilor cu glioame maligne (Prados et al 2001). 3.3 CHIMIOTERAPIA Trialurile clinice ce au comparat radioterapia versus radioterapie plus chimioterapie au aratat o creştere a duratei medii de supravieţuire în cazul folosirii radioterapiei şi chimioterapiei adjuvante (Stewart et al 2002). Cea mai utilizată combinaţie medicamentoasă este numită PCV şi este formată din procarbazină, lomustină şi vincristină (Stupp et al 2005). Inhibarea genei MGMT asociată cu rezistenţa la agenţi alchilanţi s-a dovedit a fi un factor important în creştererea ratei de supravieţuire. (Heigi et al 2004). 4. RECEPTORII TIROZIN-KINAZICI ŞI LIGANZII LOR 4.1 Familia IGF. Liganzii şi receptorii IGF Factorul de creştere insulinic de tip 1 (IGF-1) este o proteină codificată de gena IGF1 aflată pe cromozomul 12. IGF-1 este sintetizată în principal în ficat şi producerea sa este stimulată de hormonul de creştere (GH). IGF-1 şi receptorul său specific IGF-1R sunt implicaţi în stimularea creşterii celulare, proliferare şi inhibarea apoptozei. IGF-1R deţine un rol important în menţinerea fenotipului malign, supraexpresia sa fiind exprimată în mai multe tipuri de cancere. 11

12 4.2 FAMILIA EGF. Liganzii şi receptorii EGF EGFR (receptorul factorului de creştere epidermal) este un receptor tirozinkinazic, implicat în stimularea diviziunii celulare, proliferare şi invazie. Gena EGF prezintă amplificări şi supraexpresie în aproximativ 40% din cazurile de glioblastom, majoritatea primar (Ekstrand et.al. 1992). Cea mai comună mutaţie a EGFR este EGFRvIII, mutaţie ce constă în deleţia exonilor 2 7, rezultând o variantă de receptor fără domeniul de legare ligand-specific funcţional. 4.3 FAMILIA PDGF. Liganzii şi receptorii PDGF Liganzii factorului de creştere derivat din plachete: PDGF-A, -B, -C,-D, sunt recunoscuţi de două tipuri de receptori PDGFR-α (specifici celulelor tumorale) şi PDGFR-β (specifici vaselor tumorale) localizaţi pe membrana celulara. Supraexpresia PDGFR-α apare frecvent în glioamele cu grad scăzut de malignitate şi este implicată în progresia acestora către glioblastomul secundar. Supraexpresia PDGFR-α este frecvent însotită şi de LOH 17p şi deleţia genei TP FAMILIA VEGF. Liganzii si receptorii VEGF Liganzii familiei VEGF (VEGF A, VEGF B, VEGF C, VEGF D) influentează răspunsul celular prin legarea de receptorii specifici VEGFR 1, VEGFR 2, VEGFR 3, sunt activaţi prin transfosforilare. În procesul angiogenezei, cea mai importantă izoformă este VEGF A, ce are rol în stimularea migrării şi mitozei celulelor endoteliale, în formarea lumenului vaselor de neoformaţie şi stimularea migrării monocitelor şi macrofagelor. VEGF B are rol in angiogeneza embrionară, iar VEGF C SI VEGF D au rol în angiogeneza vaselor limfatice. Niveluri crescute de VEGF au fost detectate în zonele necrotice cu hipoxie accentuată la pacienţii cu glioblastom. De asemeni, nivelurile crescute de VEGF au fost asociate cu o progresie rapidă tumorală şi un prognostic rezervat. 12

13 PARTEA SPECIALĂ (STUDIUL EXPERIMENTAL) 5. OBIECTIVE OBIECTIVUL NR. 1 - Evaluarea numărului de CEP circulante la pacienţii cu glioblastom, comparativ cu pacienţii diagnosticaţi cu tumori cerebrale de grad mic; Motivaţia studiului: În procesul de neoangiogeneză, proces important în creşterea şi invazia glioblastomului, un rol important îl joacă eliberarea şi mobilizarea celulelor progenitorii endoteliale (CEP) circulante derivate din maduva hematogenă. Un nou concept apărut recent ar fi că celulele tumorale pot produce diverse semnale moleculare ce pot elibera şi mobiliza CEP circulante la locul tumorii, unde au ca scop stimularea neoangiogenezei. În plus, markerii de suprafaţa ai celulelor stem canceroase au fost identificaţi în numeroase tipuri de cancere, evidenţiindu-se importanţa pe care o au în diagnosticarea cancerului OBIECTIVUL NR. 2 - Determinarea efectului produs de tratamentul cu STI571 asupra celulelor de glioblastom in vitro; Motivaţia studiului: Ţinte terapeutice specifice în ţesuturile maligne sunt reprezentate şi de receptorii tirozinkinazici şi receptorii tirozinkinazici constitutiv activi, deoarece aceste proteine au o expresie înaltă la nivelul ţesutului malign. Există la această oră diferite modalităţi de inactivare a receptorilor tirozinkinazici cum ar fi: anticorpi monoclonali, inhibitori cu moleculă mică, peptide sintetice, sirna etc. Un inhibitor cu moleculă mică, utilizat la aceasta oră ca tratament în diferite forme de cancer, este STI571 (Imatinib mesylate). STI571 se foloseşte în tratamentul leucemiei limfoblastice acute, dar şi alte tipuri de cancere cum ar fi tumorilor stromale gastrointestinale sau cancerul pancreatic. Nu este însă foarte bine elucidat rolul său în tratamentul glioblastomului. OBIECTIVUL NR. 3 - Evaluarea efectului citotoxic al agentului de metilare SAM asupra tumorilor cerebrale de grad inalt (high grade glioma, HGG) şi a interferenţei cu expresia IGF-1R in vitro. Motivaţia studiului: Studii anterioare au arătat ca S-adenozil-metionina (SAM), principalul donor de grupări metil în numeroase procese biologice, induce moartea celulelor canceroase prin modificarea profilului de metilare ADN. Alte studii ştiintifice sugerează, că SAM inhibă efectul mitogen al factorilor de creştere în celulele canceroase. De asemenea, studiile anterioare demonstrează importanţa IGF-1R în supravieţuirea şi proliferarea celulelor de glioblastom. 13

14 6. MATERIAL ŞI METODĂ 6.1 Materiale Materialele utilizate în studiu au avut urmatoarele provenienţe: reactivii utilizaţi pentru tratarea culturilor celulare -: Invitrogen/Life Technologies, Inc.(Rockville, MD, SUA), Bovine serum albumin (BSA) - Sigma (St. Louis, MO, USA), STI571 - Novartis Pharmaceuticals Corp. (Basel, Switzerland). IGF-1, PDGF-BB, VEGF-B, SCF, EGF şi FGF-2 - R&D Systems (Abington, UK). Kitul MTT - Roche Diagnostics Gmbh (Mannheim, Germany), S Adenosylmethyonina (SAM) - New England Bio-labs. 6.2 Celule şi culturi celulare Linia celulară BT1GB a fost etablată din segment tumoral colectat de la pacient cu glioblastom în concordanţă cu procedurile standard. Culturile celulare primare 18 şi 38 au fost etablate din tumori cerebrale cu grad înalt de malignitate (HGG), la Spitalul Universităţii Uppsala, în concordanţă cu procedurile standard. Toate liniile celulare au fost cultivate în mediu Minimum Essential Modified (MEM) ce conţine 10% ser fetal bovin (FBS), 2mM glutamină şi antibiotic (100UI/ml penicilină şi 100UI/ml streptomicină). Celulele au fost cultivate în recipiente de culturi de celule de diferite dimensiuni, în role Petri, având diametrul de 35mm, 60mm şi 150mm sau în plăcuţe cu 96 de godeuri (în funcţie de tipul fiecărui experiment), şi au fost menţinute în incubator umidifiat la 37 C, 95%O 2 şi 5%CO Tratarea celulelor Celulele de glioblastom BT1GB au fost cultivate în MEM ce conţine 10% ser fetal bovin (FBS) suplimentat cu 2mM glutamină şi antibiotic (100UI/ml penicilină şi 100UI/ml streptomicină). Celulele au fost cultivate în sticle de culturi celulare de 200ml. După atingerea confluenţei, celulele au fost tripsinizate apoi au fost transferate în plăcuţe cu 96 de godeuri (în funcţie de designul fiecărui experiment) şi menţinute în incubator umidifiat la 37 C, 95%O 2 şi 5%CO 2. Pentru determinarea dozei-răspuns, celulele au fost cultivate în condiţii standard de cultură (mediu complet cu 10% FBS şi suplimente) şi tratate cu STI M, M, 1.25 M, 2.5 M, 5 M, 10 M, 20 M, 40 M, 60 M sau 80 M, la interval de 24 de ore, timp de 3 zile. STI571 a fost diluat în apă. S-a folosit o soluţie stoc de 100 mm care a fost păstrată la - 20 C. Controlul a constat din celule netratate, cultivate în condiţii standard de cultură. Viabilitatea celulară a fost apoi analizată după 72h. Pentru determinarea rolul factorilor de 14

15 creştere asupra efectului citotoxic al tratamentului cu STI571, celulele au fost spălate de două ori cu fosfat cu soluţie tampon salină şi incubate cu mediu cu 1% ser cu sau fără adaos de 50ng/ml IGF-1, PDGF-BB, VEGF-B, SCF, EGF şi FGF-2 şi tratate cu 1.25 M, 2.5 M, 5 M sau 10 M STI551 la interval de 24 de ore, timp de 3 zile. Factorii de creştere au fost diluaţi în apă. S-a folosit o soluţie stoc de 1 g/ml care a fost păstrată la 20 C. Controlul a constat din celule netratate, cultivate în condiţii standard de cultură. După 72h a fost analizată viabilitatea celulară. Un număr de 15x10 3 celule/godeu/200μl mediu de cultură au fost cultivate pe plăcuţe cu 96 de godeuri, incubate timp de 8h şi tratate cu diferite concentraţii de STI571 şi/sau factori de creştere. Liniile celulare de HGG, 18 şi 38, au fost cultivate în MEM ce conţine 10% ser fetal bovin (FBS) suplimentat cu 2mM glutamină şi antibiotic (100UI/ml penicilină şi 100UI/ml streptomicină). Celulele au fost cultivate în sticle de culturi celulare de 200ml apoi au fost transferate în placuţe cu 96 de godeuri (4x10 3 celule/godeu) în 0.2 ml de mediu MEM standard cu diferite concentraţii de SAM (0.1 μm, 1 μm, 10 μm, 25 μm, 50 μm, 75 μm, 100 μm, 150 μm sau 200 μm) şi incubate pe un interval de 7 zile, dupa care a fost analizată viabilitatea celulară. Viabilitatea celulara a fost determinată şi prin numararea zilnică a celulelor în arii marcate în prealabil, timp de 7 zile de la tratarea celulelor. În toate experimentele efectuate în studiu au fost introduse grupuri de control, în care celulele au fost tratate numai cu substanţele folosite pentru diluţie. 6.4.Determinarea viabilitatii celulare Viabilitatea celulară a fost determinată şi prin numararea zilnica a celulelor. În acest scop, celulele au fost cultivate în sticle de culturi celulare de 200ml apoi au fost transferate în role Petri, având diametrul de 35mm. Pe partea exterioară a fundului rolelor Petri au fost în prealabil marcate anumite zone, în care apoi au fost numărate celulele la intervale de timp precizate anterior. Procentul de celule care au supravieţuit la intervalele de timp indicate în experiment a fost apoi calculat prin raportare la numarul iniţial de celule. 6.5 Determinarea timpului de dublare a celulelor (T2) Liniile celulare de HGG 18 şi 38, au fost cultivate în MEM ce conţine 10% ser fetal bovin (FBS) suplimentat cu 2mM glutamină şi antibiotic (100UI/ml penicilină şi 100UI/ml streptomicină). Celulele au fost cultivate în sticle de culturi celulare de 200ml apoi au fost 15

16 transferate transferate în role Petri, având diametrul de 35mm, la o densitate de 1000cel/ml. Celulele au fost cultivate în condiții standard timp de 7 zile, apoi au fost numărate zilnic, iar T2 a fost calculat prin metoda regresiei liniare, utilizând mai multe puncte de timp. La sfârşitul experimentului, T2 a fost calculate prin utilizarea a două puncte de timp, cu aplicarea formulei: T2 = txln2/ln( N/N0 + 1) Unde: 6.6. Western Blotting t = durata experimentului N0 = numărul iniţial de celule N = este creşterea numarului de celule pe durata experimentului Separarea şi detecţia proteinelor a fost determinată prin metoda Western Blot, desfăşurată în trei etape distincte. Prima etapă este reprezentată de separarea amestecului de proteine prin electroforeză pe un gel poliacrilamidic (PAGE). Cu ajutorul unui câmp electric, proteinele sunt apoi transferate pe o membrană de nitroceluloză. În următoarea etapă are loc tratarea proteinelor din membrană cu o soluţie care conţine anticorpii primari, specifici pentru proteinele studiate. Proteinele sunt apoi blocate cu anticorpul secundar, care se leagă de anticorpul primar formând astfel un complex de molecule de anticorp. Ultima etapă este reprezentată de detecţie, care consta în amplificarea semnalului prin metoda chemiluminiscenţei. În cazul experimentelor efectuate pentru actualul studiu, celulele au fost lizate în soluţia de lizare. Lizatul a fost centrifugat pentru îndepărtarea componentelor insolubile. Proteinele au fost cuantificate cu ajutorul kit-ului Bio-Rad Dc. Cantităţi egale de proteină au fost separate pe geluri SDS-PAGE 10% şi ulterior transferate pe membrane Immobilion-P PVDF (Millipore). Membranele au fost blocate cu lapte praf degresat 5% dizolvat în soluţie salină Tris ce conţine 0,1% Tween 20 (TBST), apoi au fost incubate cu anticorp primar diluat în lapte praf degresat 1% diluat în TBST, incubate apoi cu anticorp secundar legat de peroxidază diluat la rândul său în lapte praf degresat 1% diluat în TBST. Ulterior a fost folosit sistemul de detecţie ECL pentru determinarea Western Blot a anticorpului în conformitate cu instrucţiunile producătorului Citometrie de flux Pentru identificarea şi cuantificarea celule progenitorii endoteliale (CPE), celulele în suspensie au fost marcate fluorescent şi apoi au fost analizate prin citometrie de flux. Pentru 16

17 cuantificarea CPE circulante prin FACS (sortare celulară activată fluorescent), sangele periferic este incubat cu anticorpi conjugaţi fluorescent împotriva CD45, CD34, CD31, CD133 sau VEGFR2. Pentru fiecare procedură de izolare vor fi folosiţi markeri de control corespunzători. Dupa filtrare, numărul de celule CD45 - /CD31 + / CD34 + şi CD45 - / CD31 - /CD34 - / CD133 + /VEGFR2 + au fost cuantificate şi exprimate ca celule/ml de sânge, folosind CyFlow SL flow cytomoter şi sotware-ul FlowMax. Pentru fiecare măsurare au fost înregistrate evenimente. 6.8.Analiza statistică Toate datele reprezită media ± deviaţia standard. Datele au fost analizate folosind testul t ANOVA. Valorile p< 0.05 au fost considerate semnificative statistic. 7.REZULTATE 7.1 Numarul de CEP circulante este semnificativ mai mare la pacientii cu glioblastom comparativ cu pacientii diagnosticati cu tumori cerebrale de grad mic. În studiu au fost evaluate valorile CEP în sângele periferic colectat de la 12 pacienţi: 4 pacienţi cu glioblastom (grad IV WHO) şi 8 pacienţi cu tumori cerebrale cu grad mic de malignitate (grad I, II WHO). Dintre aceştia, 1 pacient a fost diagnosticat cu meningiom meningotelial, 1 pacient cu meningiom tranziţional, 2 pacienţi cu meningiom microchistic, 1 pacient cu meningiom cu celule clare, 2 pacienţi cu meningiom şi 1 pacient cu meningiom psamomatos. Pacienţii incluşi în studiu au fost operaţi la Clinica de Neurochirurgie a Spitalului Bagdasar Arseni Bucuresti şi au avut confirmat diagnosticul histopatologic. Determinarea valorilor celule endoteliale progenitorii (CEP) circulante din sângele periferic, colectat de la pacienţi cu tumori cerebrale, a fost făcută folosind anticorpi monoclonali împotriva CD45 (pentru excluderea celulelor hematopoietice) şi markeri endoteliali CD31, CD34, CD133 şi VEGF R2, conjugaţi direct cu fluorocromii Pacific-Blue, FITC, PE, PercPsi APC. CEP circulante (definite ca celule CD45-/CD31+/CD34+/CD133+/VEGF R2+ ) au fost cuantificate şi exprimate ca număr de celule/ml de sânge, folosind five-colour flow cytometry. Analizarea datelor a început după achiziţia a de evenimente. Din totalul de celule a fost izolată populaţia limfocitară (Fig.3.segmentul I), apoi populaţia CD45- (Fig.3 segm..ii) a fost selectată pentru marcarea cu CD31 şi CD34 (Fig.3. segm. III). În final, în Fig.3 17

18 segmentul.iv, a fost selectată populaţia celulară prezentând coexpresia CD133+ VEGFR2+. Etapele parcurse au fost aceleaşi, indiferent de tipul de tumora cerebrala, iar pentru exemplificare a fost selectat doar experimentul ce a folosit meningiomul meningotelial. I II III IV Figura 3..Numarul de CEP circulante pentru pacientul cu meningiom meningotelial Rezultatele noastre au arătat că nivelurile de CEP au fost semnificativ (p<0.05) mai mici la toţi pacienţii diagnosticaţi cu tumori de grad mic, faţă de pacienţii cu glioblastom. La pacienţii cu glioblastom am gasit în medie de 3 ori mai multe CEP decât la tumorile cu grad mic. Totuşi nu au fost observate diferenţe semnificative între grupurile cu tumori de grad mic (Fig.4) Figura 4. Comparaţie între numărul de CEP din sângele periferic al pacienţilor diagnosticaţi cu: meningiom meningotelial, meningiom tranziţional, meningiom microchistic, meningiom cu celule clare, meningiom, meningiom psamomatos şi glioblastom. Rezultatele semnificative statistic comparative cu glioblastomul (p 0,005) 18

19 Procent din control 7.2 Determinarea efectului produs de tratamentul cu STI571 asupra celulelelor de glioblastom în vitro În celulele aparţinând liniei BT1GB, citotoxicitatea produsă de tratamentul cu STI571 a fost dependentă de doza utilizată. Supravieţuirea celulelor a fost determinată la 3 zile după tratament. În primul set de experimente, a fost evaluată doza raspuns după tratamentul cu STI571 (Figura 5). Celulele BT1GB au avut o rată de supravieţuire ce a scăzut constant de la 98% după tratamentul cu M, până la 8.8% după tratamentul cu 40 M M STI571. Peste această concentraţie, rata de supravieţuire a scăzut foarte puţin, până la 7% în cazul concentraţiei 80 M M STI571. Rezultatele sunt prezentate ca procent din control mm mm mm 1.25 mm 2.5 mm 5 mm 10 mm 20 mm 40 mm 60 mm 80 mm Figura 5. Doza-răspuns după tratamentul cu STI571. Rezultatele sunt prezentate ca procent din control. Datele reprezintã medie +/- deviaþie standard a douã experimente independente. STI571 Apoi, a fost determinat efectul tratamentului cu STI571 asupra celulelor de glioblastom cultivate în condiţii standard sau fără nutrienţi (Figura 6). Din grafic, se observă că procentele de supravieţuire ale celulelor menţinute în condiţii standard au scăzut constant odată cu creşterea concentraţiei de STI571, dar valorile obţinute au fost mai mari decât cele obţinute în cazul celulelor tratate cu STI571 si cultivate în mediu cu 1% FBS. Pentru exemplificare, după tratamentul cu 10 M STI571, celulele BT1GB cultivate în mediu cu 1% FBS au supravieţuit în procent de 32,2%, iar cele cultivate în condiţii standard au supravieţuit în procent de 59,2%. Datele reprezintă medie +/- deviaţie standard a două experimente independente. Toate rezultatele obţinute au fost semnificative statistic (p 0,005). 19

20 Fold Procent din control %S 10%S 0 Control 2.5 um 5 um 10 um Figura 6. Efectul tratamentului cu STI571 asupra celulelor de glioblastom cultivate în condiţii standard sau fără nutrienţi. Rezultatele sunt prezentate ca procent din control. Datele reprezintã medie +/- deviatie standard a douã experimente independente. Rezultatele semnificative statistic fata de tratamentul cu STI571 in conditii standard (p 0,005 În următorul set de experimente, am observat efectul stimulativ al factorilor de creştere IGF-1, PDGF-BB, VEGF-B, SCF, EGF sau FGF-2 asupra celulelor de glioblastom (Figura 7). Creşterea celulară a celulelor BT1GB cultivate în mediu cu 10% FBS a fost de 0,98 ori mai mare decât a celulelor cultivate în mediu cu 1% FBS. Adăugarea factorilor de creştere a indus o creştere a proliferării celulare, comparativ cu cea celulelor cultivate în mediu cu 1% FBS, dar mult mai mică decât în cazul celulelor BT1GB cultivate în mediu cu 10% FBS %S 10%S 1%S+IFG1 1%S+PDGF-BB 1%S+VEGF-B 1%S+SCF 1%S+EGF 1%S+FGF-2 Figura 7. Efectul stimulării cu IGF-1, PDGF-BB, VEGF-B, SCF, EGF sau FGF-2 asupra creşterii celulelor de glioblastom. Rezultatele sunt prezentate ca procent din control. Datele reprezintã medie +/- deviatie standard a douã experimente independente. Rezultatele semnificative statistic comparative cu controlul (p 0,005) Este cunoscut faptul că activarea IGF-1R de către ligandul său, IGF-1, duce la activarea receptorului, care la rândul său produce un efect anti-apoptotic în celulele maligne. 20

21 Procent din control Supraexpresia sau creşterea activităţii IGF-1R a fost observată în multe tipuri de cancere, incluzând: cancer de sân (Almeida et al, 1994; Dricu et al.1999), cancer pulmonar (Cosaceanu et al. 2007; Kiaris et al. 1999), cancer de colon (Xiao et al. 2007), cancer de prostată (Figueroa et al. 1995), melanom (Xie et al. 1999) şi tumori gliale (Chakravarti et al. 2002). În glioblastom, IGF-1R a fost identificat ca potenţial marker genetic (Hui et al. 2001) şi de asemeni este implicat în rezistenţa la radio şi chimioterapie (Chakravarti et al. 2002; Carapancea et al. 2009; Carapancea et al. 2007). Pentru a verifica dacă efectul citotoxic al STI571 este mediat de inhibarea IGF-1R, am studiat efectul stimulării cu IGF-1 asupra citotoxicitaţii induse de tratamentului cu STI571 în liniile de glioblastom. Astfel, celulele au fost stimulate cu IGF-1 şi tratate cu diferite concentraţii de STI51: 2.5 M STI571 (Figura 8a), 5 M STI571 (Figura 8b), şi 10 M STI571 (Figura 8c). a b c Componente %S + 1%S IGF STI Figura 8. Rolul stimulării cu IGF-1 asupra efectului citotoxic al tratamentului cu STI571 Rezultatele semnificative statistic fata de tratamentul cu STI571 si 1% ser (p 0,005) Pentru a verifica dacă efectul citotoxic al STI571 este mediat de inhibarea PDGFR, am studiat efectul stimulării cu PDGF-BB asupra citotoxicitaţii induse de tratamentului cu STI571 în liniile de glioblastom. Astfel, celulele au fost stimulate cu PDGF-BB şi tratate cu diferite concentraţii de STI51: 2.5 M (Figura 9a), 5 M (Figura 9b), şi 10 M (Figura 9c). 21

22 a b c Componente %S + 1%S PDGF-BB + + STI Figura 9. Rolul stimulării cu PDGF-BB asupra efectului citotoxic al tratamentului cu STI571 Rezultatele semnificative statistic fata de tratamentul cu STI571 si 1% ser (p 0,005) Este, de asemenea, cunoscut faptul că activarea VEGFR de către liganzii VEGF, activează receptorii, producând un efect mitogen. Pentru a verifica dacă efectul citotoxic al STI571 este mediat de inhibarea VEGFR, am studiat efectul stimulării cu VEGF-B asupra citotoxicitaţii induse de STI571 în liniile de GB. Celulele au fost stimulate cu VEGF-B şi tratate cu diferite concentraţii de STI51: 2.5 M (Fig. 10a), 5 M (Fig. 10b), şi 10 M (Fig. 10c). a b c Componente %S + 1%S VEGF + + STI Figura 10. Rolul stimulării cu VEGF-B asupra efectului citotoxic al tratamentului cu STI571 Rezultatele semnificative statistic fata de tratamentul cu STI571 si 1% ser (p 0,005) 22

23 Ligandul SCF se leagă de receptorul c-kit şi are ca efect activarea proteinei. Pentru a verifica dacă efectul citotoxic al STI571 este mediat de inhibarea c-kit, am studiat efectul stimulării cu SCF asupra citotoxicitaţii induse de tratamentul cu STI571 în liniile de glioblastom. Astfel, celulele au fost stimulate cu SCF şi tratate cu diferite concentraţii de STI51: 2.5 M (Figura 11a), 5 M (Figura 11b), şi 10 M (Figura 11c). a b c Componente %S + 1%S SCF + + STI Figura 11. Rolul stimulării cu SCF asupra efectului citotoxic al tratamentului cu STI571 Rezultatele semnificative statistic fata de tratamentul cu STI571 si 1% ser (p 0,005) Legarea ligandului EGF de l receptorul sau, EGFR, activează acestă proteină membranară, producând un efect mitogen. Pentru a verifica dacă efectul citotoxic al STI571 este mediat de inhibarea EGFR, am studiat efectul stimulării cu EGF asupra citotoxicitaţii induse de STI571 în liniile de GB. Celulele au fost stimulate cu EGF şi tratate cu diferite concentraţii de STI51: 2.5 M (Figura 12a), 5 M (Figura 12b), şi 10 M (Figura 12c). a b c 23

24 Componente %S + 1%S EGF + + STI Figura 12. Rolul stimulării cu EGF asupra efectului citotoxic al tratamentului cu STI571 Rezultatele semnificative statistic fata de tratamentul cu STI571 si 1% ser (p 0,005) Efectul mitogen al factorului FGF este mediat de receptorul său FGFR. Pentru a verifica dacă efectul citotoxic al STI571 produce inhibarea FGFR, am studiat efectul stimulării cu FGF asupra citotoxicitaţii induse de tratamentul cu STI571 în liniile de glioblastom. Celulele au fost stimulate cu FGF şi tratate cu diferite concentraţii de STI51: 2.5 M (Figura 13a), 5 M (Figura 13b), şi 10 M (Figura 13c). a b c Componente %S + 1%S FGF + + STI Figura 13. Rolul stimulării cu FGF-2 asupra efectului citotoxic al tratamentului cu STI571 Rezultatele semnificative statistic fata de tratamentul cu STI571 si 1% ser (p 0,005) Analizând rezultatele obţinute, s-a observat că adăugarea factorilor de creştere în mediu a dus la o creştere semnificativă a proliferării celulare de la aprox. 50% în condiţii 1%S până la aprox. 70% în condiţii 1%S+IGF-1, fiind uşor diminuată la adăugarea agentului inhibitor STI51 până la aprox. 60%. Comparativ cu o rată a proliferării de aprox. 50% în condiţii de 1%S, adăugarea de STI51 a condus la o scădere a proliferării până la aprox. 25%. 24

25 cell number cell number 7.3. SAM induce citotoxicitate în celulele de GB printr-un mecanism independent de IGF-1R Studii anterioare au arătat că S-adenozil-metionina (SAM), principalul donor de grupări metil în numeroase procese biologice, ar induce moartea celulelor canceroase prin modificarea profilului de metilare ADN. Alte studii ştiintifice sugerează că SAM inhibă efectul mitogen al factorilor de creştere în celulele canceroase. De asemenea, studiile noastre anterioare demonstrează importanţa IGF-1R în supravieţuirea şi proliferarea celulelor de GB. În acest studiu, a fost investigat efectul citotoxic indus de SAM în doua linii celulare de GB (18 şi 38). Celulele în cultură au fost expuse timp de 7 zile la diferite concentraţii de SAM, iar viabilitatea celulară a fost analizată prin numărarea celulelor viabile în arii marcate. Un parametru important în determinarea dinamicii creşterii celulare este parametrul numit Timpul de dublare celulară (T2). T2 arată care este timpul necesar unei diviziuni celulare complete. În cazul bolilor maligne, valoarea T2 este o indicaţie importanţa în prognosticul bolii şi permite să se evalueze eficienţei medicamentelor utilizate în radio şi / sau chimioterapie. De aceea, am determinat T2 pentru cele două linii celulare HGG (18, 38) luate în studiu., T2 a fost determinat prin metoda regresiei liniare, utilizând mai multe puncte de timp şi prin utilizarea a două puncte de timp. Rezultatele obţinute prin metoda regresiei liniare, arată că T2 are valoarea 79,5±5,54 pentru linia celulară 18 şi 75,25±6,02 pentru linia 38. Valorile T2 obţinute prin metoda care ia in calcul doua puncte de timp, nu difera semnificativ de cele obtinute prin metoda regresiei liniare, astfel: valoarea T2 pentru linia celulară 18 este 66,5±7,778, iar valoarea T2 pentru linia celulară 38 este 59,5±6,3634 (Figura 14) y = 0,262x + 6,875 R² = 0, HGG time (h) y = 0,895x + 10,41 R² = 0, HGG Time (h) Figura 14. Valoarea T2 pentru liniile celulare 18 HGG şi 38 HGG 25

26 % of Contr % Contro Efectul citotoxic indus de SAM in doua linii celulare de GB (18 si 38), a fost apoi investigat. In urma tratamentului cu 0,1 M SAM, linia celulara 18 prezinta o usoara crestere a viabilitatii celulare in primele 4 zile de la inceperea tratamentului, proliferarea celulara crescand cu 7% 17 % si 5% in a doua, a treia si respectiv a patra zi de tratament. Tratamentul cu 0,1 M SAM produce inhibarea proliferarii celulare si o nesemnificativa moarte celulara a celulelor apartinand liniei celulara 18, la 5 zile dupa tratament, acest efect persistand pana la sfarsitul perioadei de tratament, astfel, aprox. 97% din celule au supravietuit la sfarsitul perioadei de 7 zile de tratament (Fig 33). In linia celulara 38, efectul citotoxic al tratamentului cu 0,1 M SAM apare abia dupa 7 zile. In primele 6 zile de tratament, viabilitatea celulara creste cu 12% in a doua zi, 19% in a treia zi, 24% in a patra zi, 27% in a cincea zi su cu 8% in a sasea zi. Tratamentul cu 200 M SAM a produs un efect citotoxic mult mai mare in cele doua linii celulare luate in studiu. Celulele apartinand liniei celulare 18 au supravieţuit în procent de 91% in a doaua zi, 77% in a treia zi, 59% in a patra zi, 52% in a cincea zi, 43% in a sasea zi, iar in utima zi a tratamentului s-a inregistrat o scadere a viabilitatii celulare cu 32%. Tratamentul cu 200 M SAM are efect citotoxic si asupra celulelor apartinand liniei celulare 38, astfel,celulele au supravieţuit în procent de 93% in a doua zi, 85% in a treia zi, 77% in a patra zi, 70% in a cincea zi, 59% in a sasea zi, iar numai 45% in a saptea si de tratament (Fig. 15). TAM 0,1µM TAM 200 µm d 2d 3d 4d 5d 6d 7d 0 1d 2d 3d 4d 5d 6d 7d Time (days) Time (days) Figura 15. Efectul tratamentului cu SAM asupra viabilităţii celulelor de glioblastom la concentraţiile extreme TAM IGF-1R este un receptor tirozin kinazic, codat de către oncogena igf-1r, localizată pe cromozomul 15q25-q26, promovând transformarea oncogenica, creşterea şi supravieţuirea celulelor canceroase (Yu et al. 2000). Pentru explicarea citotoxicităţii observate în urma tratamentelor cu diferite doze de SAM, s-a analizat posibilitatea ca efectul citotoxic indus de SAM să fie cauzat de hipermetilarea oncogenei igf-1r şi inhibarea expresiei proteinei IGF- 26

27 1R.Rezultatele obtinute dupa tratamentul cu SAM au aratat, insa, ca aceata substanta nu are efect asupra expresiei membranare a IGF-1R, in concentratia cea mai mare utilizata in studiu (200 µm), sugerand faptul ca efectul citotoxic indus de SAM nu este relationat cu modificarea profilului de metilare ADN al genei igf-1r (Figura 16), Figura 16. Efectul SAM asupra expresiei IGF-1R in liniile celulare 18 şi 38 Proteina β-actina a fost utilizata drept control. 27

28 8. DISCUŢII Studiul 1. Glioblastoamele sunt tumori cerebrale heterogene, caracterizate prin celularitate intensă, activitate mitotică, necroză şi proliferări microvasculare. Datorită acestor proliferări microvasculare accentuate ce nu apar în glioamele de grad mic, fiind specifice glioamelor maligne şi în special glioblastomului, s-a concluzionat că procesele de angiogeneză şi neoangiogeneză joacă un rol esenţial în creşterea şi invazia glioblastomului. În procesul de neoangiogeneză un rol important îl joacă eliberarea şi mobilizarea celulelor progenitorii endoteliale (CEP) circulante derivate din maduva hematogenă. Recent, CEP circulante izolate din sângele periferic au atras atenţia ca posibile ţinte terapeutice. Date din diverse studii experimentale şi clinice au arătat că utilizarea inhibitorilor angiogenezei reduce vascularizaţia şi progresia tumorală. Conceptul apărut recent ar fi că celulele tumorale pot produce diverse semnale moleculare ce pot elibera şi mobiliza CEP circulante produse de maduva hematogenă la locul tumorii unde au ca scop stimularea neoangiogenezei. CEP circulante au fost studiate în diverse tipuri de cancere: pulmonar, mamar, gastric, ovarian, iar valorile acestora au fost depistate semnificativ crescute în sângele periferic faţă de normal. De asemeni şi în cazul glioblastomului, studiile au arătat o creştere importantă a CEP circulante faţă de indivizii normali. În cadrul experimentelor realizate am încercat să determin şi să compar nivelurile de CEP circulante din sângele periferic la pacienţi cu tumori cerebrale de grade diferite. Numărul de CEP circulante a fost semnificativ mai mare la pacienţii cu tumori cerebrale înalt maligne (glioblastom) comparativ cu pacienţii diagnosticaţi cu tumori cerebrale de grad mic, sugerând că CEP circulante pot deveni un potenţial biomarker în glioblastom, dar şi o ţintă terapeutică pentru viitoarele noi tratamente ale glioblastomului Studiul 2. Ţinte terapeutice specifice în ţesuturile maligne sunt reprezentate şi de receptorii tirozinkinazici şi receptorii tirozinkinazici constitutiv activi, deoarece aceste proteine au o expresie înaltă la nivelul ţesutului malign. Multiple studii ştiinţifice au evidenţiat faptul că glioblastoamele supraexprimă numeroşi receptori tirozinkinazici precum EGFR, PDGFR, VEGFR, SCFR şi FGFR. Pornind de la acest concept, se poate spune că receptorii tirozinkinazici sunt consideraţi ţinte terapeutice specifice în tratamentul glioblastomului. STI571 (Imatinib mesylate) este un inhibitor cu moleculă mică, utilizat la aceasta oră ca tratament în diferite forme de cancer. Mai multe studii de specialitate care au evaluat efectul 28

29 citotoxic al STI571 asupra celulelor tumorale în vitro, au demonstrat că acest inhibitor este mai activ în absenţa nutrienţilor. Datele obţinute în studiul actual sunt în concordanţă cu cele publicate de alte studii. Rezultatele noastre arată că citotoxicitatea indusă de STI571 în celulele BT1GB a fost dependentă de doza folosită. Concentraţia la care se obţine CI50 a fost de aproximativ 12,5 M. Efectul citotoxic indus de tratamentul cu 1.25 M STI571 a fost cu 35% mai mare în celulele cultivate în mediu cu 1% FBS comparativ cu celulele de glioblastom cultivate în mediu cu 10% FBS, putându-se observa deci efectul chiar de la cele mai mici concentraţii de STI571. Se presupune că acţiunea antitumorală a STI571 este dată de inhibarea oncoproteinei Bcr-Abl şi a receptorilor tirozinkinazici PDGF şi ckit, mecanismul de acţiune al acestei molecule nu este însă complet cunoscut până în prezent. Studii clinice şi experimentale din ultimii ani au arătat efectul citotoxic al STI571 poate fi influenţat de nivelul factorilor de creştere. Este deja cunoscut faptul că tumorile cerebrale secretă o mare varietate de factori de creştere care stimulează proliferarea, supravieţuirea, migrarea şi angiogeneza tumorală, printr-un sistem de acţiune autocrin sau paracrin. Mai mult, cercetări recente au arătat ca potenţialul citotoxic al STI571 este afectat de prezenţa unor factori de creştere. În conformitate cu rezultatele publicate de alte grupuri de cercetare, rezultatele noastre arată că stimularea cu factorii de creştere IGF-1, PDGF-BB, VEGF-B, SCF, EGF sau FGF-2 a crescut proliferarea celulele de glioblastom de aproximativ 0.5 ori. Inhibitorul cu moleculă mică STI571, s-a dovedit a fi mai eficient în tratamentul glioblastomului în absenţa nutrienţilor. Concentraţia STI571 care determină un efect citotoxic de 50% la celulele fără nutrienţi este de 4 ori mai mică (aprox. 2.5 M STI571) decât cea la care se atinge efect citotoxic de 50% în condiţii standard (aprox 12,5 M STI571). Prezenţa factorilor de creştere în mediu are ca efect reducerea efectului citotoxic al tratamentului cu STI571, acesta observându-se chiar de la cele mai mici concentraţii de STI571 de 2.5 M astfel: stimularea cu IGF1 a fost redusă cu 7.4%, cea cu PDGF-BB a fost redusă cu 8.8%, stimularea cu VEGF-B a fost redusă cu 6.9%, stimularea cu SCF a fost redusă cu 12.8%, stimularea cu EGF aa fost redusă cu 7.1%, iar stimularea cu FGF-2 a fost redusă cu 7.5%. Studiul 3. Studii anterioare au arătat ca S-adenozil-metionina (SAM), principalul donor de grupări metil în numeroase procese biologice, ar induce moartea celulelor canceroase prin modificarea profilului de metilare ADN. Alte studii ştiintifice sugerează, că SAM inhibă efectul 29

Efectul citotoxic al tratamentului cu Gleevec asupra celulelor de glioblastom: influenţa factorilor de creştere

Efectul citotoxic al tratamentului cu Gleevec asupra celulelor de glioblastom: influenţa factorilor de creştere 9 PRCTICÅ MEDICLÅ CERCETRE ŞTIINºIFICÅ Efectul citotoxic al tratamentului cu Gleevec asupra celulelor de glioblastom: influenţa factorilor de creştere Cytotoxic effect of Gleevec treatment on glioblastoma

More information

- REZUMAT- INVESTIGAREA ROLULUI FACTORILOR DE CREȘTERE ȘI A CELULELOR STEM MEZENCHIMALE ÎN TRATAMENTUL CANCERULUI CEREBRAL

- REZUMAT- INVESTIGAREA ROLULUI FACTORILOR DE CREȘTERE ȘI A CELULELOR STEM MEZENCHIMALE ÎN TRATAMENTUL CANCERULUI CEREBRAL UNIVERSITATEA DE MEDICINĂ ŞI FARMACIE DIN CRAIOVA TEZĂ DE DOCTORAT - REZUMAT- INVESTIGAREA ROLULUI FACTORILOR DE CREȘTERE ȘI A CELULELOR STEM MEZENCHIMALE ÎN TRATAMENTUL CANCERULUI CEREBRAL Conducător

More information

Titlul lucrării propuse pentru participarea la concursul pe tema securității informatice

Titlul lucrării propuse pentru participarea la concursul pe tema securității informatice Titlul lucrării propuse pentru participarea la concursul pe tema securității informatice "Îmbunătăţirea proceselor şi activităţilor educaţionale în cadrul programelor de licenţă şi masterat în domeniul

More information

Semnale şi sisteme. Facultatea de Electronică şi Telecomunicaţii Departamentul de Comunicaţii (TC)

Semnale şi sisteme. Facultatea de Electronică şi Telecomunicaţii Departamentul de Comunicaţii (TC) Semnale şi sisteme Facultatea de Electronică şi Telecomunicaţii Departamentul de Comunicaţii (TC) http://shannon.etc.upt.ro/teaching/ssist/ 1 OBIECTIVELE CURSULUI Disciplina îşi propune să familiarizeze

More information

UNIVERSITATEA DE MEDICINĂ ŞI FARMACIE DIN CRAIOVA ŞCOALA DOCTORALĂ TEZĂ DE DOCTORAT

UNIVERSITATEA DE MEDICINĂ ŞI FARMACIE DIN CRAIOVA ŞCOALA DOCTORALĂ TEZĂ DE DOCTORAT UNIVERSITATEA DE MEDICINĂ ŞI FARMACIE DIN CRAIOVA ŞCOALA DOCTORALĂ TEZĂ DE DOCTORAT TERAPIA MOLECULARĂ A GLIOBLASTOMULUI PRIN INHIBAREA SELECTIVĂ A RECEPTORILOR TIROZINKINAZICI REZUMAT CONDUCĂTOR DE DOCTORAT:

More information

Modalitǎţi de clasificare a datelor cantitative

Modalitǎţi de clasificare a datelor cantitative Modalitǎţi de clasificare a datelor cantitative Modul de stabilire a claselor determinarea pragurilor minime şi maxime ale fiecǎrei clase - determinǎ modul în care sunt atribuite valorile fiecǎrei clase

More information

Universitatea de Medicină şi Farmacie CRAIOVA Şcoala Doctorală

Universitatea de Medicină şi Farmacie CRAIOVA Şcoala Doctorală Universitatea de Medicină şi Farmacie CRAIOVA Şcoala Doctorală TEZĂ DE DOCTORAT REZUMAT ACTUALITĂŢI ÎN DIAGNOSTICUL ŞI TRATAMENTUL TUMORILOR CEREBRALE Conducător de doctorat, Prof. Univ. Dr. Anica Dricu

More information

GHID DE TERMENI MEDIA

GHID DE TERMENI MEDIA GHID DE TERMENI MEDIA Definitii si explicatii 1. Target Group si Universe Target Group - grupul demografic care a fost identificat ca fiind grupul cheie de consumatori ai unui brand. Toate activitatile

More information

INFLUENŢA CÂMPULUI MAGNETIC ASUPRA DINAMICII DE CREŞTERE"IN VITRO" LA PLANTE FURAJERE

INFLUENŢA CÂMPULUI MAGNETIC ASUPRA DINAMICII DE CREŞTEREIN VITRO LA PLANTE FURAJERE INFLUENŢA CÂMPULUI MAGNETIC ASUPRA DINAMICII DE CREŞTERE"IN VITRO" LA PLANTE FURAJERE T.Simplăceanu, C.Bindea, Dorina Brătfălean*, St.Popescu, D.Pamfil Institutul Naţional de Cercetere-Dezvoltare pentru

More information

Reflexia şi refracţia luminii. Aplicaţii. Valerica Baban

Reflexia şi refracţia luminii. Aplicaţii. Valerica Baban Reflexia şi refracţia luminii. Aplicaţii. Sumar 1. Indicele de refracţie al unui mediu 2. Reflexia şi refracţia luminii. Legi. 3. Reflexia totală 4. Oglinda plană 5. Reflexia şi refracţia luminii în natură

More information

Versionare - GIT ALIN ZAMFIROIU

Versionare - GIT ALIN ZAMFIROIU Versionare - GIT ALIN ZAMFIROIU Controlul versiunilor - necesitate Caracterul colaborativ al proiectelor; Backup pentru codul scris Istoricul modificarilor Terminologie și concepte VCS Version Control

More information

INFLUENŢA CÂMPULUI MAGNETIC ASUPRA GERMINĂRII "IN VITRO" LA PLANTE FURAJERE

INFLUENŢA CÂMPULUI MAGNETIC ASUPRA GERMINĂRII IN VITRO LA PLANTE FURAJERE INFLUENŢA CÂMPULUI MAGNETIC ASUPRA GERMINĂRII "IN VITRO" LA PLANTE FURAJERE T.Simplăceanu, Dorina Brătfălean*, C.Bindea, D.Pamfil*, St.Popescu Institutul Naţional de Cercetere-Dezvoltare pentru Tehnologii

More information

Metrici LPR interfatare cu Barix Barionet 50 -

Metrici LPR interfatare cu Barix Barionet 50 - Metrici LPR interfatare cu Barix Barionet 50 - Barionet 50 este un lan controller produs de Barix, care poate fi folosit in combinatie cu Metrici LPR, pentru a deschide bariera atunci cand un numar de

More information

Structura și Organizarea Calculatoarelor. Titular: BĂRBULESCU Lucian-Florentin

Structura și Organizarea Calculatoarelor. Titular: BĂRBULESCU Lucian-Florentin Structura și Organizarea Calculatoarelor Titular: BĂRBULESCU Lucian-Florentin Chapter 3 ADUNAREA ȘI SCĂDEREA NUMERELOR BINARE CU SEMN CONȚINUT Adunarea FXP în cod direct Sumator FXP în cod direct Scăderea

More information

Procesarea Imaginilor

Procesarea Imaginilor Procesarea Imaginilor Curs 11 Extragerea informańiei 3D prin stereoviziune Principiile Stereoviziunii Pentru observarea lumii reale avem nevoie de informańie 3D Într-o imagine avem doar două dimensiuni

More information

PACHETE DE PROMOVARE

PACHETE DE PROMOVARE PACHETE DE PROMOVARE Școala de Vară Neurodiab are drept scop creșterea informării despre neuropatie diabetică și picior diabetic în rândul tinerilor medici care sunt direct implicați în îngrijirea și tratamentul

More information

CAIETUL DE SARCINI Organizare evenimente. VS/2014/0442 Euro network supporting innovation for green jobs GREENET

CAIETUL DE SARCINI Organizare evenimente. VS/2014/0442 Euro network supporting innovation for green jobs GREENET CAIETUL DE SARCINI Organizare evenimente VS/2014/0442 Euro network supporting innovation for green jobs GREENET Str. Dem. I. Dobrescu, nr. 2-4, Sector 1, CAIET DE SARCINI Obiectul licitaţiei: Kick off,

More information

Subiecte Clasa a VI-a

Subiecte Clasa a VI-a (40 de intrebari) Puteti folosi spatiile goale ca ciorna. Nu este de ajuns sa alegeti raspunsul corect pe brosura de subiecte, ele trebuie completate pe foaia de raspuns in dreptul numarului intrebarii

More information

ISBN-13:

ISBN-13: Regresii liniare 2.Liniarizarea expresiilor neliniare (Steven C. Chapra, Applied Numerical Methods with MATLAB for Engineers and Scientists, 3rd ed, ISBN-13:978-0-07-340110-2 ) Există cazuri în care aproximarea

More information

DECLARAȚIE DE PERFORMANȚĂ Nr. 101 conform Regulamentului produselor pentru construcții UE 305/2011/UE

DECLARAȚIE DE PERFORMANȚĂ Nr. 101 conform Regulamentului produselor pentru construcții UE 305/2011/UE S.C. SWING TRADE S.R.L. Sediu social: Sovata, str. Principala, nr. 72, judetul Mures C.U.I. RO 9866443 Nr.Reg.Com.: J 26/690/1997 Capital social: 460,200 lei DECLARAȚIE DE PERFORMANȚĂ Nr. 101 conform Regulamentului

More information

Mecanismul de decontare a cererilor de plata

Mecanismul de decontare a cererilor de plata Mecanismul de decontare a cererilor de plata Autoritatea de Management pentru Programul Operaţional Sectorial Creşterea Competitivităţii Economice (POS CCE) Ministerul Fondurilor Europene - Iunie - iulie

More information

MS POWER POINT. s.l.dr.ing.ciprian-bogdan Chirila

MS POWER POINT. s.l.dr.ing.ciprian-bogdan Chirila MS POWER POINT s.l.dr.ing.ciprian-bogdan Chirila chirila@cs.upt.ro http://www.cs.upt.ro/~chirila Pornire PowerPoint Pentru accesarea programului PowerPoint se parcurg următorii paşi: Clic pe butonul de

More information

Tumorile stromale gastrointestinale Recomandările ESMO pentru diagnosticare, tratament şi monitorizare

Tumorile stromale gastrointestinale Recomandările ESMO pentru diagnosticare, tratament şi monitorizare Tumorile stromale gastrointestinale Recomandările ESMO pentru diagnosticare, tratament şi monitorizare P. G. Casali 1, L. Jost 2, P. Reichardt 3, M. Schlemmer 4 & J.-Y. Blay 5 Din partea Grupului de Lucru

More information

2. Setări configurare acces la o cameră web conectată într-un router ZTE H218N sau H298N

2. Setări configurare acces la o cameră web conectată într-un router ZTE H218N sau H298N Pentru a putea vizualiza imaginile unei camere web IP conectată într-un router ZTE H218N sau H298N, este necesară activarea serviciului Dinamic DNS oferit de RCS&RDS, precum și efectuarea unor setări pe

More information

Aspecte controversate în Procedura Insolvenţei şi posibile soluţii

Aspecte controversate în Procedura Insolvenţei şi posibile soluţii www.pwc.com/ro Aspecte controversate în Procedura Insolvenţei şi posibile soluţii 1 Perioada de observaţie - Vânzarea de stocuri aduse în garanţie, în cursul normal al activității - Tratamentul leasingului

More information

Programul: Resurse umane. Tipul proiectului: Proiecte de cercetare pentru stimularea constituirii de tinere echipe de cercetare independente tip TE

Programul: Resurse umane. Tipul proiectului: Proiecte de cercetare pentru stimularea constituirii de tinere echipe de cercetare independente tip TE Programul: Resurse umane Tipul proiectului: Proiecte de cercetare pentru stimularea constituirii de tinere echipe de cercetare independente tip TE Titlul proiectului: Efectele polifenolilor în modularea

More information

ARBORI AVL. (denumiti dupa Adelson-Velskii si Landis, 1962)

ARBORI AVL. (denumiti dupa Adelson-Velskii si Landis, 1962) ARBORI AVL (denumiti dupa Adelson-Velskii si Landis, 1962) Georgy Maximovich Adelson-Velsky (Russian: Гео ргий Макси мович Адельсо н- Ве льский; name is sometimes transliterated as Georgii Adelson-Velskii)

More information

Auditul financiar la IMM-uri: de la limitare la oportunitate

Auditul financiar la IMM-uri: de la limitare la oportunitate Auditul financiar la IMM-uri: de la limitare la oportunitate 3 noiembrie 2017 Clemente Kiss KPMG in Romania Agenda Ce este un audit la un IMM? Comparatie: audit/revizuire/compilare Diferente: audit/revizuire/compilare

More information

SUMMARY OF PHD. THESIS RESEARCH ON ALUMINUM VACUUM CASTING OF COMPLEX PARTS

SUMMARY OF PHD. THESIS RESEARCH ON ALUMINUM VACUUM CASTING OF COMPLEX PARTS Investeşte în oameni! FONDUL SOCIAL EUROPEAN Programul Operational Sectorial pentru Dezvoltarea Resurselor Umane 2007-2013 Eng. Alina Ioana LUCA SUMMARY OF PHD. THESIS RESEARCH ON ALUMINUM VACUUM CASTING

More information

Textul si imaginile din acest document sunt licentiate. Codul sursa din acest document este licentiat. Attribution-NonCommercial-NoDerivs CC BY-NC-ND

Textul si imaginile din acest document sunt licentiate. Codul sursa din acest document este licentiat. Attribution-NonCommercial-NoDerivs CC BY-NC-ND Textul si imaginile din acest document sunt licentiate Attribution-NonCommercial-NoDerivs CC BY-NC-ND Codul sursa din acest document este licentiat Public-Domain Esti liber sa distribui acest document

More information

Controlul posttranscriptional al expresiei genelor ARN interferenta in tumorile maligne

Controlul posttranscriptional al expresiei genelor ARN interferenta in tumorile maligne UNIVERSITATEA BABES BOLYAI FACULTATEA DE CHIMIE SI INGINERIE CHIMICA Controlul posttranscriptional al expresiei genelor ARN interferenta in tumorile maligne Rezumat Teza de doctorat Conducator de doctorat:

More information

Excel Advanced. Curriculum. Școala Informală de IT. Educație Informală S.A.

Excel Advanced. Curriculum. Școala Informală de IT. Educație Informală S.A. Excel Advanced Curriculum Școala Informală de IT Tel: +4.0744.679.530 Web: www.scoalainformala.ro / www.informalschool.com E-mail: info@scoalainformala.ro Cuprins 1. Funcții Excel pentru avansați 2. Alte

More information

TEHNICAL UNIVERSITY OF CLUJ-NAPOCA CONTRIBUTIONS AND RESEARCHREGARDING ROBOT CONTROL BASED ON IMAGE PROCESSING

TEHNICAL UNIVERSITY OF CLUJ-NAPOCA CONTRIBUTIONS AND RESEARCHREGARDING ROBOT CONTROL BASED ON IMAGE PROCESSING Investeşte în oameni! FONDUL SOCIAL EUROPEAN Programul Operaţional Sectorial Dezvoltarea Resurselor Umane 2007 2013 Axa prioritară: 1 Educaţia şi formarea profesională în sprijinul creşterii economice

More information

INFORMAȚII DESPRE PRODUS. FLEXIMARK Stainless steel FCC. Informații Included in FLEXIMARK sample bag (article no. M )

INFORMAȚII DESPRE PRODUS. FLEXIMARK Stainless steel FCC. Informații Included in FLEXIMARK sample bag (article no. M ) FLEXIMARK FCC din oțel inoxidabil este un sistem de marcare personalizată în relief pentru cabluri și componente, pentru medii dure, fiind rezistent la acizi și la coroziune. Informații Included in FLEXIMARK

More information

ANTICOLLISION ALGORITHM FOR V2V AUTONOMUOS AGRICULTURAL MACHINES ALGORITM ANTICOLIZIUNE PENTRU MASINI AGRICOLE AUTONOME TIP V2V (VEHICLE-TO-VEHICLE)

ANTICOLLISION ALGORITHM FOR V2V AUTONOMUOS AGRICULTURAL MACHINES ALGORITM ANTICOLIZIUNE PENTRU MASINI AGRICOLE AUTONOME TIP V2V (VEHICLE-TO-VEHICLE) ANTICOLLISION ALGORITHM FOR VV AUTONOMUOS AGRICULTURAL MACHINES ALGORITM ANTICOLIZIUNE PENTRU MASINI AGRICOLE AUTONOME TIP VV (VEHICLE-TO-VEHICLE) 457 Florin MARIAŞIU*, T. EAC* *The Technical University

More information

REVISTA NAŢIONALĂ DE INFORMATICĂ APLICATĂ INFO-PRACTIC

REVISTA NAŢIONALĂ DE INFORMATICĂ APLICATĂ INFO-PRACTIC REVISTA NAŢIONALĂ DE INFORMATICĂ APLICATĂ INFO-PRACTIC Anul II Nr. 7 aprilie 2013 ISSN 2285 6560 Referent ştiinţific Lector univ. dr. Claudiu Ionuţ Popîrlan Facultatea de Ştiinţe Exacte Universitatea din

More information

Evoluția pieței de capital din România. 09 iunie 2018

Evoluția pieței de capital din România. 09 iunie 2018 Evoluția pieței de capital din România 09 iunie 2018 Realizări recente Realizări recente IPO-uri realizate în 2017 și 2018 IPO în valoare de EUR 312.2 mn IPO pe Piața Principală, derulat în perioada 24

More information

[HABILITATION THESIS] October, 2015 HABILITATION THESIS

[HABILITATION THESIS] October, 2015 HABILITATION THESIS HABILITATION THESIS ADVANCED APPROACHES ON FOOD SAFETY AND FUNCTIONALITY ABORDĂRI AVANSATE ASUPRA SIGURANȚEI ȘI FUNCȚIONALITĂȚII ALIMENTELOR Associate Professor Nicoleta STĂNCIUC Dunărea de Jos University

More information

LIDER ÎN AMBALAJE EXPERT ÎN SISTEMUL BRAILLE

LIDER ÎN AMBALAJE EXPERT ÎN SISTEMUL BRAILLE LIDER ÎN AMBALAJE EXPERT ÎN SISTEMUL BRAILLE BOBST EXPERTFOLD 80 ACCUBRAILLE GT Utilajul ACCUBRAILLE GT Bobst Expertfold 80 Aplicarea codului Braille pe cutii a devenit mai rapidă, ușoară și mai eficientă

More information

Ghid identificare versiune AWP, instalare AWP şi verificare importare certificat în Store-ul de Windows

Ghid identificare versiune AWP, instalare AWP şi verificare importare certificat în Store-ul de Windows Ghid identificare versiune AWP, instalare AWP 4.5.4 şi verificare importare certificat în Store-ul de Windows Data: 28.11.14 Versiune: V1.1 Nume fişiser: Ghid identificare versiune AWP, instalare AWP 4-5-4

More information

Citation for published version (APA): Filipeanu, C. (2001). Intracellular angiotensin II: from myth to reality Groningen: s.n.

Citation for published version (APA): Filipeanu, C. (2001). Intracellular angiotensin II: from myth to reality Groningen: s.n. University of Groningen Intracellular angiotensin II Filipeanu, Catalin IMPORTANT NOTE: You are advised to consult the publisher's version (publisher's PDF) if you wish to cite from it. Please check the

More information

INSTRUMENTE DE MARKETING ÎN PRACTICĂ:

INSTRUMENTE DE MARKETING ÎN PRACTICĂ: INSTRUMENTE DE MARKETING ÎN PRACTICĂ: Marketing prin Google CUM VĂ AJUTĂ ACEST CURS? Este un curs util tuturor celor implicați în coordonarea sau dezvoltarea de campanii de marketingși comunicare online.

More information

EPIDEMIOLOGIE GENERALĂ. Dr. Cristian Băicuş Medicală Colentina, 2005

EPIDEMIOLOGIE GENERALĂ. Dr. Cristian Băicuş Medicală Colentina, 2005 EPIDEMIOLOGIE GENERALĂ Dr. Cristian Băicuş Medicală Colentina, 2005 metodologia cercetării (validitate) = EPIDEMIOLOGIA CLINICĂ cercetare clinică ŞI BIOSTATISTICA articol, prezentare evaluarea critică

More information

D în această ordine a.î. AB 4 cm, AC 10 cm, BD 15cm

D în această ordine a.î. AB 4 cm, AC 10 cm, BD 15cm Preparatory Problems 1Se dau punctele coliniare A, B, C, D în această ordine aî AB 4 cm, AC cm, BD 15cm a) calculați lungimile segmentelor BC, CD, AD b) determinați distanța dintre mijloacele segmentelor

More information

UNIVERSITATEA DE MEDICINĂ ŞI FARMACIE DIN CRAIOVA ȘCOALA DOCTORALĂ TEZĂ DE DOCTORAT

UNIVERSITATEA DE MEDICINĂ ŞI FARMACIE DIN CRAIOVA ȘCOALA DOCTORALĂ TEZĂ DE DOCTORAT UNIVERSITATEA DE MEDICINĂ ŞI FARMACIE DIN CRAIOVA ȘCOALA DOCTORALĂ TEZĂ DE DOCTORAT Rolul factorilor de creștere în progresia carcinoamelor bazocelulare REZUMAT CONDUCĂTOR DE DOCTORAT: PROF.UNIV. DR. SIMIONESCU

More information

Fenomene electrostatice şi materiale dielectrice. Modelare experimentală şi numerică şi aplicaţii industriale.

Fenomene electrostatice şi materiale dielectrice. Modelare experimentală şi numerică şi aplicaţii industriale. REZUMAT Fenomene electrostatice şi materiale dielectrice. Modelare experimentală şi numerică şi aplicaţii industriale. Lucrarea de faţă prezintă succint, dar argumentat, activitatea profesională desfăşurată

More information

METODE DE EVALUARE A IMPACTULUI ASUPRA MEDIULUI ŞI IMPLEMENTAREA SISTEMULUI DE MANAGEMENT DE MEDIU

METODE DE EVALUARE A IMPACTULUI ASUPRA MEDIULUI ŞI IMPLEMENTAREA SISTEMULUI DE MANAGEMENT DE MEDIU UNIVERSITATEA POLITEHNICA BUCUREŞTI FACULTATEA ENERGETICA Catedra de Producerea şi Utilizarea Energiei Master: DEZVOLTAREA DURABILĂ A SISTEMELOR DE ENERGIE Titular curs: Prof. dr. ing Tiberiu APOSTOL Fond

More information

Reţele Neuronale Artificiale în MATLAB

Reţele Neuronale Artificiale în MATLAB Reţele Neuronale Artificiale în MATLAB Programul MATLAB dispune de o colecţie de funcţii şi interfeţe grafice, destinate lucrului cu Reţele Neuronale Artificiale, grupate sub numele de Neural Network Toolbox.

More information

Prelucrarea numerică a semnalelor

Prelucrarea numerică a semnalelor Prelucrarea numerică a semnalelor Assoc.Prof. Lăcrimioara GRAMA, Ph.D. http://sp.utcluj.ro/teaching_iiiea.html 27 februarie 2017 Lăcrimioara GRAMA (sp.utcluj.ro) Prelucrarea numerică a semnalelor 27 februarie

More information

Eficiența energetică în industria românească

Eficiența energetică în industria românească Eficiența energetică în industria românească Creșterea EFICIENȚEI ENERGETICE în procesul de ardere prin utilizarea de aparate de analiză a gazelor de ardere București, 22.09.2015 Karsten Lempa Key Account

More information

Curriculum vitae. 36 ani România Nationalitate: română Mobil:

Curriculum vitae. 36 ani România Nationalitate: română Mobil: Curriculum vitae Adina Elena Ceobanu Sos. Pacurari, nr. 7, Iași 36 ani România Nationalitate: română Mobil: 0040744666467 Email: adice01@yahoo.com Educatie: Septembrie 2014- până în prezent: doctorat în

More information

Mods euro truck simulator 2 harta romaniei by elyxir. Mods euro truck simulator 2 harta romaniei by elyxir.zip

Mods euro truck simulator 2 harta romaniei by elyxir. Mods euro truck simulator 2 harta romaniei by elyxir.zip Mods euro truck simulator 2 harta romaniei by elyxir Mods euro truck simulator 2 harta romaniei by elyxir.zip 26/07/2015 Download mods euro truck simulator 2 harta Harta Romaniei pentru Euro Truck Simulator

More information

Introducere. Rezecţia prostatică transuretrală (TURP) reprezintă principala modalitate terapeutică

Introducere. Rezecţia prostatică transuretrală (TURP) reprezintă principala modalitate terapeutică COMPLICAŢII PRECOCE DUPĂ TUR-P C Catarig 1, R Boja 2, V Oşan 2, L Schwartz 1, S Nedelcu 1, O Golea 1, A Chiujdea 1, O Mălău 1, I Muntoi 1, L Vass 2, B Uzun 1 1 Spitalul Clinic de Urgenţă, Tg. Mureş; 2

More information

Candlesticks. 14 Martie Lector : Alexandru Preda, CFTe

Candlesticks. 14 Martie Lector : Alexandru Preda, CFTe Candlesticks 14 Martie 2013 Lector : Alexandru Preda, CFTe Istorie Munehisa Homma - (1724-1803) Ojima Rice Market in Osaka 1710 devine si piata futures Parintele candlesticks Samurai In 1755 a scris The

More information

UNIVERSITATEA DE MEDICINĂ ŞI FARMACIE GR. T. POPA IAŞI FACULTATEA DE MEDICINĂ DISCIPLINA DE ASISTENŢĂ PRIMARĂ A STĂRII DE SĂNĂTATE ŞI EPIDEMIOLOGIE

UNIVERSITATEA DE MEDICINĂ ŞI FARMACIE GR. T. POPA IAŞI FACULTATEA DE MEDICINĂ DISCIPLINA DE ASISTENŢĂ PRIMARĂ A STĂRII DE SĂNĂTATE ŞI EPIDEMIOLOGIE UNIVERSITATEA DE MEDICINĂ ŞI FARMACIE GR. T. POPA IAŞI FACULTATEA DE MEDICINĂ DISCIPLINA DE ASISTENŢĂ PRIMARĂ A STĂRII DE SĂNĂTATE ŞI EPIDEMIOLOGIE TEZĂ DE DOCTORAT REZUMAT PROGNOSTICUL CANCERULUI DE COL

More information

Managementul Proiectelor Software Metode de dezvoltare

Managementul Proiectelor Software Metode de dezvoltare Platformă de e-learning și curriculă e-content pentru învățământul superior tehnic Managementul Proiectelor Software Metode de dezvoltare 2 Metode structurate (inclusiv metodele OO) O mulțime de pași și

More information

RESEARCH CONCERNING THE INFLUENCE OF ANGLE OF FILING FROM THE KNIFE BLADES VINDROVERS ON THE MECHANICAL WORK ON CUTTING

RESEARCH CONCERNING THE INFLUENCE OF ANGLE OF FILING FROM THE KNIFE BLADES VINDROVERS ON THE MECHANICAL WORK ON CUTTING BULETINUL INSTITUTULUI POLITEHNIC DIN IAŞI Publicat de Universitatea Tehnică Gheorghe Asachi din Iaşi Tomul LIX (LXIII), Fasc. 2, 13 SecŃia CONSTRUCłII DE MAŞINI RESEARCH CONCERNING THE INFLUENCE OF ANGLE

More information

FACTORİ DE İNFLUENŢA ASUPRA DURATEİ DE SUPRAVİETUİRE İN CANCERUL COLORECTAL

FACTORİ DE İNFLUENŢA ASUPRA DURATEİ DE SUPRAVİETUİRE İN CANCERUL COLORECTAL UNİVERSİTATEA DE MEDİCİNĂ ŞI FARMACİE DİN CRAİOVA ȘCOALA DOCTORALĂ FACTORİ DE İNFLUENŢA ASUPRA DURATEİ DE SUPRAVİETUİRE İN CANCERUL COLORECTAL - rezumat - CONDUCATOR DOCTORAT PROF. UNİV. DR. CİUREA TUDOREL

More information

Olimpiad«Estonia, 2003

Olimpiad«Estonia, 2003 Problema s«pt«m nii 128 a) Dintr-o tabl«p«trat«(2n + 1) (2n + 1) se ndep«rteaz«p«tr«telul din centru. Pentru ce valori ale lui n se poate pava suprafata r«mas«cu dale L precum cele din figura de mai jos?

More information

ACTA TECHNICA NAPOCENSIS

ACTA TECHNICA NAPOCENSIS 273 TECHNICAL UNIVERSITY OF CLUJ-NAPOCA ACTA TECHNICA NAPOCENSIS Series: Applied Mathematics, Mechanics, and Engineering Vol. 58, Issue II, June, 2015 SOUND POLLUTION EVALUATION IN INDUSTRAL ACTIVITY Lavinia

More information

Generatorul cu flux axial cu stator interior nemagnetic-model de laborator.

Generatorul cu flux axial cu stator interior nemagnetic-model de laborator. Generatorul cu flux axial cu stator interior nemagnetic-model de laborator. Pentru identificarea performanţelor la funţionarea în sarcină la diferite trepte de turaţii ale generatorului cu flux axial fară

More information

La fereastra de autentificare trebuie executati urmatorii pasi: 1. Introduceti urmatoarele date: Utilizator: - <numarul dvs de carnet> (ex: "9",

La fereastra de autentificare trebuie executati urmatorii pasi: 1. Introduceti urmatoarele date: Utilizator: - <numarul dvs de carnet> (ex: 9, La fereastra de autentificare trebuie executati urmatorii pasi: 1. Introduceti urmatoarele date: Utilizator: - (ex: "9", "125", 1573" - se va scrie fara ghilimele) Parola: -

More information

EN teava vopsita cu capete canelate tip VICTAULIC

EN teava vopsita cu capete canelate tip VICTAULIC ArcelorMittal Tubular Products Iasi SA EN 10217-1 teava vopsita cu capete canelate tip VICTAULIC Page 1 ( 4 ) 1. Scop Documentul specifica cerintele tehnice de livrare pentru tevi EN 10217-1 cu capete

More information

Compania. Misiune. Viziune. Scurt istoric. Autorizatii şi certificari

Compania. Misiune. Viziune. Scurt istoric. Autorizatii şi certificari Compania Misiune. Viziune. Misiunea noastră este de a contribui la îmbunătăţirea serviciilor medicale din România prin furnizarea de produse şi servicii de cea mai înaltă calitate, precum şi prin asigurarea

More information

A NOVEL ACTIVE INDUCTOR WITH VOLTAGE CONTROLLED QUALITY FACTOR AND SELF-RESONANT FREQUENCY

A NOVEL ACTIVE INDUCTOR WITH VOLTAGE CONTROLLED QUALITY FACTOR AND SELF-RESONANT FREQUENCY BULETINUL INSTITUTULUI POLITEHNIC DIN IAŞI Publicat de Universitatea Tehnică Gheorghe Asachi din Iaşi Tomul LX (LXIV), Fasc. 4, 2014 Secţia ELECTROTEHNICĂ. ENERGETICĂ. ELECTRONICĂ A NOVEL ACTIVE INDUCTOR

More information

Raport științific sintetic final

Raport științific sintetic final Raport științific sintetic final privind implementarea proiectului PN-II-ID-PCE-2012-4-0067 Titlu proiect: Modelarea in silico a proceselor biologice din tumorile hipoxice în vederea individualizării protocolului

More information

DE CE SĂ DEPOZITAŢI LA NOI?

DE CE SĂ DEPOZITAŢI LA NOI? DEPOZITARE FRIGORIFICĂ OFERIM SOLUŢII optime şi diversificate în domeniul SERVICIILOR DE DEPOZITARE FRIGORIFICĂ, ÎNCHIRIERE DE DEPOZIT FRIGORIFIC CONGELARE, REFRIGERARE ŞI ÎNCHIRIERE DE SPAŢII FRIGORIFICE,

More information

Managementul referinţelor cu

Managementul referinţelor cu TUTORIALE DE CULTURA INFORMAŢIEI Citarea surselor de informare cu instrumente software Managementul referinţelor cu Bibliotecar Lenuţa Ursachi PE SCURT Este gratuit Poţi adăuga fişiere PDF Poţi organiza,

More information

Propuneri pentru teme de licență

Propuneri pentru teme de licență Propuneri pentru teme de licență Departament Automatizări Eaton România Instalație de pompare cu rotire în funcție de timpul de funcționare Tablou electric cu 1 pompă pilot + 3 pompe mari, cu rotirea lor

More information

Updating the Nomographical Diagrams for Dimensioning the Concrete Slabs

Updating the Nomographical Diagrams for Dimensioning the Concrete Slabs Acta Technica Napocensis: Civil Engineering & Architecture Vol. 57, No. 1 (2014) Journal homepage: http://constructii.utcluj.ro/actacivileng Updating the Nomographical Diagrams for Dimensioning the Concrete

More information

Terapia genică. Dr. hab. m. Viorel Nacu

Terapia genică. Dr. hab. m. Viorel Nacu Terapia genică Dr. hab. m. Viorel Nacu Terapia genică este o metodă indreptată reduce alterarea informaţiei genetice celulare, aplicabilă în tratamentul leziunilor prin transfer genetic, a codurilor factorilor

More information

Dispozitive Electronice şi Electronică Analogică Suport curs 02 Metode de analiză a circuitelor electrice. Divizoare rezistive.

Dispozitive Electronice şi Electronică Analogică Suport curs 02 Metode de analiză a circuitelor electrice. Divizoare rezistive. . egimul de curent continuu de funcţionare al sistemelor electronice În acest regim de funcţionare, valorile mărimilor electrice ale sistemului electronic sunt constante în timp. Aşadar, funcţionarea sistemului

More information

Prima. Evadare. Ac9vity Report. The biggest MTB marathon from Eastern Europe. 7th edi9on

Prima. Evadare. Ac9vity Report. The biggest MTB marathon from Eastern Europe. 7th edi9on Prima Evadare Ac9vity Report 2015 The biggest MTB marathon from Eastern Europe 7th edi9on Prima Evadare in numbers Par%cipants subscribed 3.228, 2.733 started the race and 2.400 finished the race 40 Photographers

More information

EFICACITATEA STALEVO ÎN TRATAMENTUL FLUCTUAŢIILOR MOTORII DIN BOALA PARKINSON

EFICACITATEA STALEVO ÎN TRATAMENTUL FLUCTUAŢIILOR MOTORII DIN BOALA PARKINSON 11 PROBLEME DE TERAPIE EFICACITATEA STALEVO ÎN TRATAMENTUL FLUCTUAŢIILOR MOTORII DIN BOALA PARKINSON Efficiency of Stalevo in treatment of motor fluctuations from Parkinson disease Dr. Armand Frăsineanu

More information

Studiu: IMM-uri din România

Studiu: IMM-uri din România Partenerul tău de Business Information & Credit Risk Management Studiu: IMM-uri din România STUDIU DE BUSINESS OCTOMBRIE 2015 STUDIU: IMM-uri DIN ROMÂNIA Studiul privind afacerile din sectorul Întreprinderilor

More information

Ec. Roxana Mirela GĂZDAC SUMMARY. PhD THESIS

Ec. Roxana Mirela GĂZDAC SUMMARY. PhD THESIS Investeşte în oameni! FONDUL SOCIAL EUROPEAN Programul Operaţional Sectorial Dezvoltarea Resurselor Umane 2007 2013 Axa prioritară: 1 Educaţia şi formarea profesională în sprijinul creşterii economice

More information

Keywords: QOL, renal transplant, anephric patient, haemodialysis, renal failure due to malignant lithiasis.

Keywords: QOL, renal transplant, anephric patient, haemodialysis, renal failure due to malignant lithiasis. STUDIUL CALITĂŢII VIEŢII FOLOSIND SF-36 HEALTH SURVEY TEST LA PACIENŢI TRANSPLANTAŢI, PACIENŢI HEMODIALIZAŢI, PACIENŢI ANEFRICI DUPĂ NEOPLASME RENALE ŞI PACIENŢI UREMICI CU UROLITIAZĂ MALIGNĂ COMPARATIVE

More information

EFECTUL TRATĂRII SONICE ASUPRA MICROBIOLOGIEI APEI DE DUNĂRE

EFECTUL TRATĂRII SONICE ASUPRA MICROBIOLOGIEI APEI DE DUNĂRE Efectul tratării sonice asupra microbiologiei apei de Dunăre 35 EFECTUL TRATĂRII SONICE ASUPRA MICROBIOLOGIEI APEI DE DUNĂRE A. Ştefan, dr.hab.prof.univ. G. Bălan Universitatea Dunărea de jos din Galaţi,

More information

Buletinul AGIR nr. 3/2012 iunie-august. Assis. Eng. Ciprian AFANASOV PhD. University "Ştefan cel Mare" Suceava

Buletinul AGIR nr. 3/2012 iunie-august. Assis. Eng. Ciprian AFANASOV PhD. University Ştefan cel Mare Suceava STEP-DOWN VOLTAGE CONVERTER FOR STUDENTS STUDY STEP-DOWN VOLTAGE CONVERTER FOR STUDENTS STUDY Assis. Eng. Ciprian AFANASOV PhD University "Ştefan cel Mare" Suceava REZUMAT. În cadrul lucrării s-au s studiat

More information

CHAMPIONS LEAGUE 2017 SPONSOR:

CHAMPIONS LEAGUE 2017 SPONSOR: NOUA STRUCTURĂ a Ch League Pe viitor numai fosta divizie A va purta numele Champions League. Fosta divizie B va purta numele Challenger League iar fosta divizie C se va numi Promotional League. CHAMPIONS

More information

STARS! Students acting to reduce speed Final report

STARS! Students acting to reduce speed Final report STARS! Students acting to reduce speed Final report Students: Chiba Daniel, Lionte Radu Students at The Police Academy Alexandru Ioan Cuza - Bucharest 25 th.07.2011 1 Index of contents 1. Introduction...3

More information

Intensitatea tehnologică a exporturilor în anul 2012

Intensitatea tehnologică a exporturilor în anul 2012 Intensitatea tehnologică a exporturilor în anul 2012 Analiza i evoluţiei în timp a comerţului exterior conform intensităţii tehnologice prezintă o importanţă deosebită deoarece reflectă evoluţia calitativă

More information

OBSERVATIONS REGARDING THE AERIAL BEHAVIOUR OF THE SPARROWHAWK (ACCIPITER NISUS) (LINNAEUS 1758) IN THE RÂUL DOAMNEI HYDROGRAPHICAL BASIN

OBSERVATIONS REGARDING THE AERIAL BEHAVIOUR OF THE SPARROWHAWK (ACCIPITER NISUS) (LINNAEUS 1758) IN THE RÂUL DOAMNEI HYDROGRAPHICAL BASIN Muzeul Olteniei Craiova. Oltenia. Studii şi comunicări. Ştiinţele Naturii. Tom. 26, No. 1/21 ISSN 1454-6914 OBSERVATIONS REGARDING THE AERIAL BEHAVIOUR OF THE SPARROWHAWK (ACCIPITER NISUS) (LINNAEUS 1758)

More information

Recomandări de tratament pentru persoanele cu leucemie mieloidă cronică (LMC)

Recomandări de tratament pentru persoanele cu leucemie mieloidă cronică (LMC) Recomandări de tratament pentru persoanele cu leucemie mieloidă cronică (LMC) Un rezumat pentru pacienți al recomandărilor organizației europene LeukemiaNet (2013) pentru managementul leucemiei mieloide

More information

NOTE PRIVIND MODELAREA MATEMETICĂ ÎN REGIM CVASI-DINAMIC A UNEI CLASE DE MICROTURBINE HIDRAULICE

NOTE PRIVIND MODELAREA MATEMETICĂ ÎN REGIM CVASI-DINAMIC A UNEI CLASE DE MICROTURBINE HIDRAULICE NOTE PRIVIND MODELAREA MATEMETICĂ ÎN REGIM CVASI-DINAMIC A UNEI CLASE DE MICROTURBINE HIDRAULICE Eugen DOBÂNDĂ NOTES ON THE MATHEMATICAL MODELING IN QUASI-DYNAMIC REGIME OF A CLASSES OF MICROHYDROTURBINE

More information

MODELUL UNUI COMUTATOR STATIC DE SURSE DE ENERGIE ELECTRICĂ FĂRĂ ÎNTRERUPEREA ALIMENTĂRII SARCINII

MODELUL UNUI COMUTATOR STATIC DE SURSE DE ENERGIE ELECTRICĂ FĂRĂ ÎNTRERUPEREA ALIMENTĂRII SARCINII MODELUL UNUI COMUTATOR STATIC DE SURSE DE ENERGIE ELECTRICĂ FĂRĂ ÎNTRERUPEREA ALIMENTĂRII SARCINII Adrian Mugur SIMIONESCU MODEL OF A STATIC SWITCH FOR ELECTRICAL SOURCES WITHOUT INTERRUPTIONS IN LOAD

More information

Capete terminale şi adaptoare pentru cabluri de medie tensiune. Fabricaţie Südkabel Germania

Capete terminale şi adaptoare pentru cabluri de medie tensiune. Fabricaţie Südkabel Germania CAPETE TERMINALE ŞI ADAPTOARE PENTRU CABLURI DE MEDIE TENSIUNE Capete terminale şi adaptoare pentru cabluri de medie tensiune. Fabricaţie Südkabel Germania Terminale de interior pentru cabluri monopolare

More information

EMA confirmă recomandările pentru reducerea la minimum a riscului de apariție a infecției cerebrale LMP asociată cu utilizarea Tysabri

EMA confirmă recomandările pentru reducerea la minimum a riscului de apariție a infecției cerebrale LMP asociată cu utilizarea Tysabri 25/04/2016 EMA/266665/2016 EMA confirmă recomandările pentru reducerea la minimum a riscului de apariție a infecției cerebrale LMP asociată cu utilizarea Tysabri La pacienții cu risc crescut, trebuie avută

More information

RAPORT DE EVALUARE A TEHNOLOGIILOR MEDICALE DCI: PEMBROLIZUMABUM

RAPORT DE EVALUARE A TEHNOLOGIILOR MEDICALE DCI: PEMBROLIZUMABUM RAPORT DE EVALUARE A TEHNOLOGIILOR MEDICALE DCI: PEMBROLIZUMABUM INDICAȚIE: MONOTERAPIE PENTRU TRATAMENTUL DE PRIMĂ LINIE AL CARCINOMULUI PULMONAR, ALTUL DECÂT CEL CU CELULE MICI (NSCLC), METASTATIC, LA

More information

CORELATII ÎNTRE PROPRIETATILE HÂRTIILOR COMPONENTE SI CALITATEA CARTONULUI ONDULAT. II

CORELATII ÎNTRE PROPRIETATILE HÂRTIILOR COMPONENTE SI CALITATEA CARTONULUI ONDULAT. II CORELATII ÎNTRE PROPRIETATILE HÂRTIILOR COMPONENTE SI CALITATEA CARTONULUI ONDULAT. II. INFLUENTA CALITATII CARTONULUI ONDULAT ASUPRA UNOR CARACTERISTICI ALE CUTIILOR CORRELATIONS BETWEEN PAPERS CHARACTERISTICS

More information

Utilizarea metodelor statistice în evaluarea riscului financiar

Utilizarea metodelor statistice în evaluarea riscului financiar Utilizarea metodelor statistice în evaluarea riscului financiar Conf. univ. dr. Emanuela IONESCU Asistent univ. dr. Amelia DIACONU Asistent univ. dr. Alina GHEORGHE Universitatea Artifex din Bucureşti

More information

PARTENERI STROMALI IMPLICAłI ÎN ANGIOGENEZA DIN CARCINOAMELE SCUAMOASE ORALE: STUDIU HISTOPATOLOGIC ŞI IMUNOHISTOCHIMIC

PARTENERI STROMALI IMPLICAłI ÎN ANGIOGENEZA DIN CARCINOAMELE SCUAMOASE ORALE: STUDIU HISTOPATOLOGIC ŞI IMUNOHISTOCHIMIC UNIVERSITATEA DE MEDICINĂ ŞI FARMACIE DIN CRAIOVA TEZĂ DE DOCTORAT REZUMAT PARTENERI STROMALI IMPLICAłI ÎN ANGIOGENEZA DIN CARCINOAMELE SCUAMOASE ORALE: STUDIU HISTOPATOLOGIC ŞI IMUNOHISTOCHIMIC Doctorand:

More information

UTILIZAREA CELULELOR STEM PLURIPOTENTE INDUSE (ipsc) DIN FIBROBLASTE/STEM MEZENCHIMALE ÎN PATOLOGIA OFTALMOLOGICĂ

UTILIZAREA CELULELOR STEM PLURIPOTENTE INDUSE (ipsc) DIN FIBROBLASTE/STEM MEZENCHIMALE ÎN PATOLOGIA OFTALMOLOGICĂ UNIVERSITATEA DE MEDICINĂ ŞI FARMACIE Grigore T. Popa Iaşi FACULTATEA DE MEDICINĂ DENTARĂ UTILIZAREA CELULELOR STEM PLURIPOTENTE INDUSE (ipsc) DIN FIBROBLASTE/STEM MEZENCHIMALE ÎN PATOLOGIA OFTALMOLOGICĂ

More information

earning every day-ahead your trust stepping forward to the future opcom operatorul pie?ei de energie electricã și de gaze naturale din România Opcom

earning every day-ahead your trust stepping forward to the future opcom operatorul pie?ei de energie electricã și de gaze naturale din România Opcom earning every day-ahead your trust stepping forward to the future opcom operatorul pie?ei de energie electricã și de gaze naturale din România Opcom RAPORT DE PIA?Ã LUNAR MARTIE 218 Piaţa pentru Ziua Următoare

More information

I NTRODUCERE M ETODOLOGIE O BIECTIVE CARACTERISTICI PRINCIPALE ALE PREVALENŢEI ŞI SEVERITĂŢII EPISODULUI DEPRESIV MAJOR ÎN N ROMÂNIA CERCETARE

I NTRODUCERE M ETODOLOGIE O BIECTIVE CARACTERISTICI PRINCIPALE ALE PREVALENŢEI ŞI SEVERITĂŢII EPISODULUI DEPRESIV MAJOR ÎN N ROMÂNIA CERCETARE CERCETARE Management în sănătate XIV/2/2010; pp 28-37 I NTRODUCERE În ultimele decade a crescut interesul pentru măsurarea consecinţelor tulburărilor mintale asupra activităţilor zilnice şi asupra rolurilor

More information

CANCERUL DE RECT RECIDIVAT

CANCERUL DE RECT RECIDIVAT Articole originale Jurnalul de Chirurgie, Iasi, 007, Vol., Nr. [ISSN 584 94] CANCERUL DE RECT RECIDIVAT C. Pleşca, C. Dragomir, Silvia Tighiliu Spitalul Judeţean de Urgenţă Botoşani Clinica a III-a Chirurgie,

More information

Class D Power Amplifiers

Class D Power Amplifiers Class D Power Amplifiers A Class D amplifier is a switching amplifier based on pulse-width modulation (PWM) techniques Purpose: high efficiency, 80% - 95%. The reduction of the power dissipated by the

More information

Nume şi Apelativ prenume Adresa Număr telefon Tip cont Dobânda Monetar iniţial final

Nume şi Apelativ prenume Adresa Număr telefon  Tip cont Dobânda Monetar iniţial final Enunt si descriere aplicatie. Se presupune ca o organizatie (firma, banca, etc.) trebuie sa trimita scrisori prin posta unui numar (n=500, 900,...) foarte mare de clienti pe care sa -i informeze cu diverse

More information

Software Process and Life Cycle

Software Process and Life Cycle Software Process and Life Cycle Drd.ing. Flori Naghiu Murphy s Law: Left to themselves, things tend to go from bad to worse. Principiile de dezvoltare software Principiul Calitatii : asigurarea gasirii

More information

UNIVERSITATEA DE MEDICINA ȘI FARMACIE CRAIOVA ȘCOALA DOCTORALĂ TEZĂ DE DOCTORAT

UNIVERSITATEA DE MEDICINA ȘI FARMACIE CRAIOVA ȘCOALA DOCTORALĂ TEZĂ DE DOCTORAT UNIVERSITATEA DE MEDICINA ȘI FARMACIE CRAIOVA ȘCOALA DOCTORALĂ TEZĂ DE DOCTORAT CORELAȚII IMUNOHISTOCHIMICE ȘI MOLECULARE LA NIVELUL MICROVASCULARIZAȚIEI VENOASE ÎN MELANOMUL CUTANAT PRIMAR REZUMAT CONDUCĂTOR

More information